高考生物试题技能分析（2021全国乙卷非选择题选考题选修3部分）

这道题相比预期的难度还是低了很多的，只要记住了基因工程中的基本概念，拿满分是不难的。

基因工程中最主要的两种工具酶包括限制性核算内切酶（也叫限制酶）和DNA连接酶。DNA连接酶又可以分为两类，分别是E·coli DNA连接酶和 DNA连接酶。其中E·coli DNA只能链接粘性末端（即限制酶从识别序列中轴线两侧切割留下的末端），也就是EcoR I和Pst I两种限制酶切下的DNA片段末端。而 DNA连接酶则不论是粘性末端还是平末端（即限制酶从识别序列中轴线切割留下的末端）都能连接了，因此EcoR I、Sma I、Pst I和EcoR V切割留下的片段都可以用 DNA连接酶连接。

当然是DNA分子中脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键啦。

这道题考得就比较有水平了，如果不能理解运载体上各个部分的功能的话，这道题是难拿满分了。

运载体需要满足的条件有以下三个，而每一个条件都是与其需要满足的功能相对应的：

1. 具有一个或多个限制酶切割位点。是为了目的基因的插入。

2. 具有复制原点。是为了目的基因能够随着运载体自我复制。

3. 具有标记基因。是为了方便筛选出导入了目的基因的细胞，标记基因一般是抗生素的抗性基因，导入了抗生素抗性基因（目的基因也一般在运载体上）的细菌就能够在含抗生素的培养基上存活。当然有的时候，色素、荧光蛋白相关的基因也可以作为标记基因，只不过没有抗生素抗性基因方便罢了。

而如果要构建表达载体的话，还要在目的基因的两侧添加启动子和终止子。

启动子是做什么的？RNA聚合酶识别、结合和驱动转录的一段DNA序列。