TPCR——可用于将目的片段整合到质粒的快捷方法

       将目的片段插入到质粒的指定位点，一种成熟的方法是利用PCR扩增目的片段，然后利用酶切酶连将片段插入载体中。但是实验中我曾遇到这几种情况：1、质粒是低拷贝的，提取浓度较低，又在经过酶切纯化之后损失较大。后续经过多次方法改进才提高质粒浓度。2、部分质粒长度较大，一些试剂盒不满足其长度范围，需要购买新的试剂盒，对于像我所在的这种贫困的实验室是一笔巨额。3、对于已经构建好的质粒，插入的片段需要进行删减、添加部分片段。等等

     TPCR以原产载体为模板进行PCR扩增，随后将PCR产物当长引物，以受体载体为模板再次进行PCR全质粒扩增，以此将目的片段整合到受体载体中，无需中间产物纯化，也无需任何商业试剂盒。最后用DpnI处理后的PCR产物进行转化。

      该方法所用的高保真酶最好是适合长片段扩增。

      引物设计、PCR操作等注意事项详见文献[1]。

参考文献：

[1] Erijman A, Dantes A, Bernheim R, Shifman JM, Peleg Y. Transfer-PCR (TPCR): a highway for DNA cloning and protein engineering. J Struct Biol. 2011 Aug;175(2):171-7. doi: 10.1016/j.jsb.2011.04.005. Epub 2011 Apr 15. PMID: 21515384.