Fluorescein diacetate (FDA)

荧光素二乙酸酯 (FDA) 是一种细胞渗透性酯酶底物，可作为活性探针，测量激活其荧光所需的酶活性和细胞膜完整性，这是其荧光产物在细胞内保留所必需的。 在被细胞内酯酶水解后，这种 AM 酯会产生荧光素。

图1.FDA 可透过细胞膜并在活细胞内积聚为荧光素

 由于荧光素的亲水性不如 BCECF 或钙黄绿素，因此荧光素从细胞中的渗漏率相当高。 FDA 也用于流式细胞术。 荧光素的激发和发射波长分别为 488 nm 和 530 nm。

图2. FDA染色的 HeLa细胞

使用案例

图3.植物细胞的 FDA 和 PI 染色。 a 显示植物细胞的荧光素二乙酸酯 (FDA) 和碘化丙啶 (PI) 染色的图表。 上图：非荧光 FDA 分子通过完整的质膜并被细胞内酯酶水解产生荧光素。 不可透过膜的荧光素在细胞质中积累并呈现绿色荧光。 底部：在质膜破裂的非活性细胞中，PI 进入细胞并嵌入 DNA，在细胞核中形成亮红色荧光复合物。 PI 还会对活细胞和死细胞的细胞壁进行染色。 b 用 FDA（绿色）和 PI（红色）染色的水稻鞘表皮细胞（顶部）和紧靠其下方的叶肉细胞（底部）的单平面共聚焦图像。 比例尺= 20 μm。 c FDA 染色的水稻鞘表皮细胞的时程平均像素强度。 蓝线是细胞质荧光定义区域的强度测量值的平均值±SD（每个时间点 n = 6）。 荧光素强度平均在染色后 15 分钟达到峰值，然后稳步下降。