葡萄球菌性骨髓炎动物模型【动物实验代做】

葡萄球菌性骨髓炎动物模型【动物实验代做】

【造模机制】70%~80%人类骨髓炎是由金黄色葡萄球菌引起的。细菌往往通过血源播散至骨骼（干骺端），炎症急性期过后出现窦道、无效腔、死骨，在治疗上十分困难。将一定量的葡萄球菌注人大鼠、鸡、兔、狗、羊等动物骨髓腔中均可引起骨髓炎，其发病过程和病理变化均与人类十分相似。本模型以兔为例介绍葡萄球菌性骨髓炎动物模型。

【造模方法】先配制金黄色葡萄球菌悬液。将细菌室提供的菌种在肉汤培养基中培养并传代1次后，用比浊法配成密度为1×10°/ml细菌悬液，注入小鼠腹腔让其增殖以恢复菌种毒力。24小时后将小鼠剖腹，取腹腔液，划线接种于普通培养基中，37℃培养 24小时,桃取纯化菌种，在肉汤培养基中再传代一次。造模前配成密度为3×10°/m1金黄色葡萄球菌悬液备用。造模取成年健康新西兰白兔，常规麻醉,剪去前臂毛发,碘酒酒精消毒，以桡骨中下1/3处为中心，取前臂外侧纵向切口长约1cm，逐层切开，显露桡骨，用电钻在桡骨上钻一个直径为 0.3cm小圆洞,放出部分骨髓。将 10°~10°葡萄球菌注人骨髓腔内(注射针头弯成钩状穿入骨髓腔内0.5cm)，拔出针头后立即用骨蜡封死钻孔，以免注射菌液及骨髓溢出骨髓腔，闭合伤口。也可在兔股骨和胫骨制造骨髓炎模型。股骨切口在股骨第三转子下0.3～1.0cm处,胫骨切口在距胫骨平台0.5～1.5cm 之间的胫骨前内侧骨面，做 1cm 大小的切口，显露骨面，直接用骨髓穿刺针穿插入髓腔，注射菌量同上，立即用骨蜡封死入口，闭合伤口。造模后分别在1周、2周、4周、8周取材做病理学检查，观察骨髓炎发生发展过程。

主要观察指标有：①肉眼观察患肢肿胀和窦道形成情况以评价炎症进展及治疗效果;②拍摄患肢X线平片观察骨骼破坏及修复情况，并可通过计算机测定髓腔破坏面积，计算其无效腔面积在治疗前后的变化；③病理观察以下情况：病灶内炎症细胞浸润，脓肿形成，死骨的大小和数量等情况；脓肿周围肉芽组织包裹，炎性细胞浸润种类与分布，肉芽组织外周接近骨皮质区，成骨细胞增生，形成软骨样组织及新生骨组织的情况；炎症穿破骨组织形成窦道向软组织蔓延情况。

【模型特点】条件适宜时，葡萄球菌一般每20~30分钟分裂一次，注入骨髓腔中的细菌短期内将大量繁殖。12小时后骨髓腔内形成脓肿，8~10天内死骨形成，以后逐渐形成无效腔并有新骨形成，4周后局部相继溃破流脓，形成窦道。X线片显示造模骨端骨膜增生，髓腔中心骨质破坏,均有无效腔和死骨存在，符合慢性骨髓炎临床征象。若不经治疗约半数的动物可能因感染扩散而死亡，必要时可切开引流，抗生素治疗。

【应用范围】本模型用于急性骨髓炎的发病机制、慢性骨髓炎的病理过程研究；也用于不同方法，如手术及各种药物制剂治疗骨髓炎的疗效和治疗机制探索。

【注意事项】

1.接种的细菌数量要足够，每只动物注入的细菌数量也要尽量一致细菌悬液浓度过低（<1×10°/ml），造模成功率较低；浓度过高（>3×10°/ml)动物死亡率太高，选用细菌浓度为（1~3）×10°/ml造模较佳。此外，细菌毒力强弱是造模成败的关键因素，目前细菌库菌种大都在培养基中反复传代，毒力大减,因此,使用前将菌种注入活体动物(如小鼠)体内，繁殖1~2代，以恢复或增加其毒力。

2.若观察过程中动物状态不佳，可行患肢髓腔钻孔引流及给予抗生素治疗，以缓解病情，延长动物生命。

【模型评价】本模型有较高的成功率（>86%），应用广泛。

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