急性肾衰竭动物模型【疾病动物模型代做】

急性肾衰竭动物模型【疾病动物模型代做】

【造模机制】油酸是一种具有较强毒性作用的脂肪,左肾动脉注射油酸后,引起肾小管上皮细胞肿胀,坏死,间质水肿,肾内血管缺血,肾微循环严重障碍,肾脏排泄功能衰竭,形成急性肾衰竭。

【造模方法】

1.动物和试剂选用 Wistar 雄性大鼠,体重 180～250g。油酸由北京 89942 部队试剂厂生产。溴代苯及氯化三苯基四氮唑(TTC)均由北京化工厂生产。

2.模型制备将大鼠随机分成 5 组,生理盐水对照组,大鼠左肾动脉注射生理盐水0.45ml/kg;油酸Ⅰ组、油酸Ⅱ组、油酸Ⅲ组、油酸I组,大鼠左肾动脉分别注射油酸 0. 05ml、0.1ml.0.125ml.0.15ml/kg。为了确保注射油酸时剂量的准确,用植物油稀释油酸。预试结果表明,单纯植物油组(0.45ml/kg)与生理盐水组无明显差别。

3.样本采集和指标测定在左肾动脉注射油酸后 10 分钟.6 小时及 24 小时分别取材,用 Fishbein 报道的 TTC染色技术观察肾 TTC 显色的改变。常规法制备电镜及光镜切片,用 400T 透射电镜观察肾小球及小管周围毛细血管超微结构。在光镜下,每张切片观察 10个高倍视野,同时对肾小管坏死及肾小管管型以 0 个/HP 为(-),1~2个/HP 为(十),3~4个/HP 为(十十),大于4 个/HP 为(十十十)的计数,对右肾,肺,心、脑、肝、小肠、睾丸也进行了光镜观察。用阻抗法描记左肾动脉注射油酸后 10 分钟、1 小时及 6 小时左肾容积脉波的变化。用美国 IL 公司 MCA 微量离心式生化分析仪测定了注射油酸后 24 小时血清尿素氮和肌酐。

【模型特点】注射油酸后,肾微循环严重障碍,使肾小球滤过和肾小管分泌、重吸收功能均受到损伤,引起肾脏排泄功能的衰竭。

1.肾微血管超微结构的改变左肾动脉注射油酸 0.15ml/kg 后 10 分钟,肾小球毛细血管内皮细胞界限不清,核染色质高度聚集呈团块状,核膜部分消失,线粒体肿胀,基底膜局部增厚。注射后 6 小时,上述改变加重,可见内皮细胞核碎裂,严重者可见内皮细胞崩解。抽酸注射后 24 小时,肾小球毛细血管内皮细胞核固缩、核碎裂,核溶解,内皮细胞崩解,基底膜破坏。

2.肾组织结构的改变肾组织结构的改变依注射油酸剂量的不同而有不同。油酸1~N组可见肾小管坏死,油酸Ⅱ~N组又可见肾小球肿胀,甚至肾小球细胞核消失,胞浆红染,结构破坏,其程度随注射油酸剂量的加大而加重。

3. TTC显色的改变 TTC显色后呈苍白色,而正常情况下则呈鲜红色。各组右肾显示鲜红色。左肾显色与油酸作用时间有关,依注射油酸剂量的不同而有区别。阳性者呈灶性不显色苍白区,多分布于皮质及外髓质,严重者累及整个肾切面。

4.阻抗式肾容积脉波的改变，注射油酸后 10 分钟、1 小时及 6 小时均可见低平及平顶波,波高分别为注前的 34%,32%、32%;比对照组降低了 65%,68%及 66％。表明肾内动脉血管弹性降低,紧张度增高,周围阻力增加,肾组织血液灌流量明显减少。

5.血清尿素氮及肌酐的改变，血清尿素氮值依注射油酸剂量的不同而有差别。油酸IV组明显高于其他各组。各组间血清肌酐无明显差别。

【应用范围】研究急性肾衰竭发病机制和治疗方法。特别对肾微循环障碍对该病发病的关键作用,以及微循环、肾间质、肾实质细胞的改变间关系研究。

【注意事项】

1.要准确选择油酸的造模剂量从模型典型、稳定看应选用 0.15ml/kg 剂量。为了保证油酸注射剂量准确,应用植物油稀释。

2.造模后观察应以微循环障碍为其特点并对应地观察肾间质,实质的病理改变,抓住微循环改变对肾实质细胞影响的主线。

【模型评估】本模型是以严重的肾微循环障碍为特点,合并间质、实质的损伤,可用于模拟人类起源于肾微循环障碍的急性肾衰竭。

ARF 实验动物模型,最常用的有五种:肾动脉夹闭、肾动脉直接输注去甲肾上腺素、甘油肌注,氯化汞及硝酸铀静脉注射。这些模型都不同程度地丰富了人们对 ARF 发病机制的认识,但多用于实质细胞方面的研究。本模型从左肾动脉注射油酸引起了肾微循环及实质细胞的损伤,建立了大鼠 ARF 模型,与上述五种模型比较,本模型是单侧肾微循环障碍为主合并肾实质严重损伤的一种新的 ARF 模型。

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