实验室发了50篇SCI的细胞，被我亲手害死了……
如何养死细胞
养细胞太难，难于上青天。本人实验室萌新一枚，进实验室时间不长，但养死了不少细胞，耽误了课题进展，错失了发SCI最好的时机，应导师要求，我总结出了一千零一种养死细胞的惨痛方法，附带实验室造污攻略。
本人经历过的养死细胞情况如下：
培养基种类不对，死了
血清浓度不对，死了血清质量不行，死了
传代时胰酶消化时间太长，死了
用枪吹得太猛，死了
细胞长得太满，死了
忙于恋爱，好几天不去看细胞，死了
一天把细胞拿出来看好多次，死了
传代次数太多，细胞老去，死了
传细胞时，光顾着和同门聊剧，细菌污染了，死了
离心转速太高，死了离心时间太长，死了
培养瓶或细胞板反复用，贴壁性不好，死了
分瓶时细胞密度太低，死了
培养瓶拿灯烤的太热，死了
培养瓶瓶盖拧太紧，死了
培养箱太热了，死了
培养箱太干了，死了
培养箱没二氧化碳了，死了
实验室停电了，死了
黑胶虫来袭，死了
还有更可怕的，还是第一千零一种死法~实验室来了新人，死了
本人实在不才，一千零一种养死细胞的经历，我全摊上了。接下来，我应导师的再三逼迫，从实验根源上日常操作中开始检讨，我在实验室犯过的七宗罪，（由于篇幅有限，先更七宗罪）以此祭奠被我害死的细胞，顺便给实验室萌新敲个警钟。检讨如下：
1第一宗罪：无菌观念薄弱，穿戴不规范
首先，我要反思下我进实验室的懒惰和侥幸心理，有时候进细胞房懒得换鞋，懒得戴口罩，甚至不戴手套，帽子。
我知道，换鞋是为了隔离真菌。戴口罩是为了防止口腔支原体污染细胞。不戴手套，根本就清除不掉手上的细菌真菌，我明知，以上懒惰造成的不规范行为，是细胞房的大忌讳，还故犯，实属罪加一等。
2第二宗罪：实验用品乱摆放
生物安全柜里操作时，门前最忌讳堆一堆杂七杂八的东西，然而，我的枪头盒、血清、管子，培养皿、移液器、酒精喷壶、酒精灯，堆积如山，我承认我没有好好整理它们。
我知道，一旦它们堵住了安全柜门前的出风口，就会有双重不良影响。我试过，这样子实验操作起来会容易手忙脚乱，导致动作幅度过大，扰乱气流。
其次是，这些堆积的实验用品一旦挡住风口，也会扰乱生物安全柜的气流，气流变化会导致外部不洁净的空气流入，也同样会导致生物安全柜的洁净作用失效。
3
第三宗罪：乱用紫外线和酒精灭菌
我明知，紫外和酒精最多只能灭细菌，对真菌伤害很小。我不该不戴手套，仅用喷壶喷手。我知道，超净台要尽量要用酒精棉球而不是用酒精喷壶，因为用酒精棉球的话，可以在灭菌的同时把菌体从手上擦下去，而喷壶只能短暂的灭了下菌而已。
所以，我以后一定要改掉这个毛病，多用棉球，少用喷壶。
4
第四宗罪：不定期清理水浴锅
我发现，水浴锅是实验室比较容易忽视的一种存在，复苏细胞的时候，37℃对细菌真菌来说就是温床。复苏细胞后，湿漉漉的冻存管，任我再怎么喷酒精也并没有什么意义了。
所以，我发誓以后一定要，定期清洁水浴锅，在清洁时务必加一些抑菌剂。注意：我不是要往里面加双抗，水浴锅里要加2%的硫酸铜，虽然这比较容易腐蚀水浴锅。总之，一定要定期清洁。
5
第五宗罪：疏于管理导致水盘污染
我深知，培养箱的水盘坐拥37℃温床的水环境，水盘里若是飘着特别大的一块块霉斑，一污染就一箱子全报废了，所以，我将谨记导师教诲，培养箱要定期用0.1%的新洁尔灭或者84清洗，交替使用，防止微生物耐药。
预防水盘污染也很重要，水盘中加入饱和的磷酸氢二钠可以有效预防细菌真菌，但是需要定期加入去离子水防止析出。
6
第六宗罪：灭菌灭不好
我知道，细胞房所有在用的枪头，必须要经过湿热灭菌，用报纸包裹好枪头，这样做是因为灭菌锅一般在细胞房外面，所以要保证内部枪头盒洁净。
烤干是为了防止内部有水分，当我开启枪头盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接触附着，也就更容易污染，所以，灭菌灭不好，是我的大错。我熟读并背诵下了这个灭菌法则，如若再不按规范操作，我直播吃手机。
7
第七宗罪：细胞污染了不抢救
明知实验室条件有限，怀疑细胞污染了，我从来不抢救，实在是不懂事，为了表达我的歉意和悔改的决心，我总结出了细胞污染后的急救方法，顺便给学弟学妹参考，各位且背且珍惜。
首先要判断污染源，一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源：有无操作不当？培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常？
其次要及时处理，若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定则新配完全培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。
如果是霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48h后污染再次出现时，再另行加入即可。
如果是真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B（两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用），也可加入300μg/mL氟康唑培养，污染控制后改用150μg/mL培养2~3代
如果怀疑是支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20μg/mL浓度2代后改用10μg/mL浓度持续培养约2周。
不过，我还是坚持认为，如若条件允许，细胞污染后最好的处理方式是：丢弃！！！
@所有细胞新手
我相信犯了以上这些养细胞罪状的实验菜狗，不止我一个人，不止我一个人，细胞培养中的常面临的BUG也远不止这些，所以，今天为了给我的检讨收尾，帮大家解决细胞新手面临的种种难题，预防未来更多的细胞被我们误伤，耽误我们发SCI。
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