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新西兰|低极性人参皂苷(Rg3)提取

2021-06-27 16:35 作者:TMR出版集团  | 我要投稿

 来源  TMR Publishing Group

 作者  Traditional Medicine Research 编辑部  

 

研究表明,新西兰主要人参皂苷的平均含量远高于中国和韩国的人参。生人参中存在的主要人参皂苷是极性人参皂苷,这些主要的人参皂苷含有多个分子结构较大的糖部分,不能被人体完全吸收,而低极性人参皂苷,可以很容易地穿过肠壁,与极性人参皂苷相比,表现出相对较高的生物和药理活性。因此,将主要人参皂苷转化为极性较低的人参皂苷将显著提高新西兰种植人参的生物利用度和药理活性。本研究采用不同的提取条件,来调节人参皂苷不同成分的浓度分布。

 

研究方法

酸提取

称取约1 g人参粉,加入20 mL一定浓度的(0.5、0.25、0.125和0 mol/L)HAc水溶液中。超声提取1h,离心,取上清液,重复三次,合并上清液。用NaOH水溶液调节至中性,用正丁醇对人参皂苷进行液-液萃取,洗涤三次除去杂质。将剩余的正丁醇溶液蒸发浓缩,冷冻干燥成粉末。


碱提取

称取约1 g人参粉,加入20mL一定浓度的(0.4、0.2、0.1和0 mol/L)NaOH水溶液中。超声提取1h,离心,取上清液,重复三次,合并上清液。用HAc水溶液调节至中性,用正丁醇对人参皂苷进行液-液萃取,洗涤三次除去杂质。将剩余的正丁醇溶液蒸发浓缩,冷冻干燥成粉末。


高温前处理

称取约1 g人参粉,加入40 mL去离子水中,在高压釜中分别提取10、20和40 min。过滤,上清液用正丁醇进行液-液萃取。洗涤三次除去杂质。将剩余的正丁醇溶液蒸发浓缩,冷冻干燥成粉末。


不同酸碱度下高温制备人参提取物

称取约1 g人参粉,加入不同酸碱度(3.0、5.0、7.0、9.0和11.0)的40 mL去离子水中。在高压釜中萃取100min。过滤,上清液用NaOH或HAc水溶液调节至中性。水层用正丁醇进行液-液萃取。洗涤三次除去杂质。将剩余的正丁醇溶液蒸发浓缩,冷冻干燥成粉末。


高效液相色谱测定

色谱条件:流动相由去离子水(A)和甲基纤维素(B)组成,梯度洗脱,0-15 min 20% B、15-25 min 20-31% B、25-35 min 31-35% B、35-40 min 35-36% B、40-45 min 36-39% B、45-75 min 39-95% B、75-85 min 95-20% B和20 % B再冲5min,柱温25℃,流速为1mL/min,进样量20 μL,检测波长203 nm。

人参皂苷的百分比按下式计算:人参皂苷X的百分比=人参皂苷X的含量/总人参皂苷含量× 100%,总人参皂苷含量为23种定量人参皂苷的总量。

结果

不同提取条件对人参皂苷高效液相色谱图的影响

用HPLC-UV法分析了不同处理产生的人参皂苷成分。采用23种人参皂苷标准品建立高效液相色谱法。人参皂苷在20至75分钟内彼此分离良好(图A)。极性人参皂苷峰出现在20-45分钟之间,低极性人参皂苷峰分布在50-75分钟之间。与未处理的人参根(图B)相比,所有处理过的人参根提取物的高效液相色谱图都有不同程度的变化(图C-H)。

A.人参皂苷标准混合物


B.去离子水在50℃超声提取1h


C.0.5 mol/L HAc水溶液在50℃超声提取1h


D.0.4mol/L氢氧化钠水溶液在50℃超声提取1h


E.去离子水在121℃(0.1兆帕)下提取40min


 F.pH 3.0的水溶液在121℃(0.1兆帕)下提取100min


G.pH 7.0的水溶液在121℃(0.1兆帕)下提取100min


H. pH 11.0的水溶液在121℃(0.1兆帕)下提取100 min


不同提取条件对人参皂苷转化的影响

酸处理可以将极性人参皂苷转化为极性较低的人参皂苷,如Rg3,这种转化在测试浓度范围内(0-0.5 mol/L)存在酸剂量依赖性效应。虽然酸处理增强了转化,但是酸促进转化非常低,难以满足工业生产的需要。

 

不同HAc浓度下提取的极性人参皂苷百分比(A)和Rg3百分比(B)。p < 0.05


在碱性溶液中,只有极少数极性人参皂苷(Sbcd和Segf)转化为低极性人参皂苷。


不同浓度的氢氧化钠处理产生的极性人参皂苷、Sbcd和Segf的百分比。Sbcd是人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd的总和,指极性PPD型人参皂苷。Segf是人参皂苷Re、Rg1和Rf的总皂苷,指极性PPT型人参皂苷。极性是指总的极性人参皂苷,由Sbcd和Segf组成。

高温处理对极性人参皂苷向低极性人参皂苷的转化表现出显著的影响。随着处理时间的增加,Segf含量显著降低,而低极性人参皂苷显著增加。在低极性人参皂苷中,Rg3占低极性人参皂苷总量的一半以上,是通过Sbcd降解获得的。此外,Segf会降解形成低极性人参皂苷Rk3和Rh4。

 

Sbcd (A)、Segf (B)、低极性人参皂苷(C)和Rg3 (D)在121°C(0.1 MpA)下提取不同时间的百分比。p < 0.05

 

高温提取是将极性人参皂苷转化为低极性人参皂苷的有效方法。此外,酸性溶剂可以促进这种转化,而碱性提取条件会导致相反的效果。

 

Sbcd (A)、Segf (B)、低极性人参皂苷(C)和Rg3 (D)在不同的酸碱度下于121°C(0.1 Mpa)提取100min的百分比。

 

结论

酸处理可以促进极性人参皂苷降解为低极性人参皂苷,在高温低酸碱度条件下,极性人参皂苷几乎可以全部转化为低极性人参皂苷。相反,碱处理可能对这种转化有负面影响。



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引用格式


Chen W, Xu WL, Shi DX, Balan P, Popovich D.. Enrichment of the less polar ginsenoside (Rg3) from ginseng grown in New Zealand by post-harvest processing and extraction. Tradit Med Res. 2021;6(4):39. doi:10.12032/TMR20210606233


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