外泌体包裹红色荧光(FMDV-VP3)/包载了CDK1-siRNA的脂质杂合型外泌体囊泡的制备
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设计并制备了脂质杂合型外泌体囊泡,以期在实现 siRNA高效递送以及消除脱离靶组织后副作用的基础上,进一步提高纳米载体靶向性,全面克服siRNA纳米载体的脱离靶组织问题。该杂合型外泌体囊泡是以细胞Sk-hep1来源的外泌体为基础,依次经破膜、反复离心去除内容物、并与DPPC (Dipalmitoylphosphatidylcholine)磷脂杂合得到的。
其中,外泌体膜的应用可以使脂质杂合型外泌体囊泡继承外泌体天然的核酸递送行为及其“归巢”性能,而加入DPPC磷脂进行杂合则可以提高囊泡的稳定性。该脂质杂合型外泌体囊泡可以通过电穿孔的方式实现对siRNA的高效包载及保护,且具有卓越的稳定性和安全性。通过巨噬细胞对脂质杂合型外泌体囊泡的摄取以及炎症因子检测的实验,说明了脂质杂合型外泌体囊泡在体内的长循环以及克服血液清除的能力;
脂质杂合型外泌体囊泡在小鼠体内的组织器官分布结果则说明了其在部位良好的“归巢”靶向性。进一步对脂质杂合型外泌体囊泡的胞内命运进行研究,结果显示,其在进入母细胞的内涵体后的命运与外泌体几乎一致,可经胞内囊泡分选途径被递送至高尔基体中,有效避开溶酶体对递送载体及siRNA的降解。
最后,同样以包载了CDK 1-siRNA的脂质杂合型外泌体囊泡在细胞水平、动物水平的基因沉默效率进行了评价。结果显示,经由脂质杂合型外泌体囊泡递送的CDK1-siRNA在细胞水平及动物水平均具有生物学活性,可以有效沉默CDK1基因的表达,在展现出显著的效果的同时对正常的肝细胞及组织。
针对非siRNA递送载体存在的递送效率低及脱离靶组织问题,依次设计并制备了脂质液晶纳米粒和脂质杂合型外泌体囊泡实现了siRNA的高效递送并克服了siRNA递送载体的脱离靶组织问题。本文为基于脂质的siRNA递送系统的合理设计提供了新思路和新方法,为 siRNA类用于临床转化提供了新的可能。
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RXYWX.2022.4.26