miR-486-3p/miR-7/IGF1R/miR-130a/miR-664-5p/miR-342-5p修饰外泌体的研究制备

今天瑞禧生物小编给大家分享的是miR-486-3p/miR-7/IGF1R/miR-130a/miR--664--5p/miR-342-5p修饰外泌体的制备研究方法，和小编一起来看看吧！

旨在进一步探索血管生成的机制，证实外泌体中富集miR-130a，并转运进入血管内皮细胞中靶向c-MYB，从而促进血管生成。以期抗血管治疗提供新的靶点，进展提供潜在的新的生物学检测指标。

研究内容及方法:

细胞水平:

收集SGC7901细胞培养液，多步差速离心提取外泌体，并于电镜下观察其形

态，Western blot检测其特异性分子标志;

生物信息学分析及荧光素酶报告基因验证miR-130a对c-MYB靶向作用。培养SGC7901，通过转染使其降表达 miR-130a，并获得相应miR-130a低表达的外泌体，不同miR-130a含量的外泌体与HUVEC细胞共培养后，进行HUVEC 细胞功能学实验;Western blot及 RT-qPCR分别检测c-MYB 与miR-130a含量变化。

直接改变HUVEC 细胞中 miR-130a含量，采用lipo-2000商业化转染试剂直

接转染血管内皮细胞使其过/降表达 miR-130a,再进行血管细胞功能学试验;Western blot及 RT-qPCR分别检测细胞内c-MYB 与 miR-130a含量变化。

3、动物实验水平

过/降表达 miR-130a荷瘤小鼠模型建立:感染SGC7901细胞系获得sGC7901-miR-130a过/降表达细胞系，裸鼠皮下接种植瘤;

荷瘤小鼠成瘤期间监测:监测小鼠大小的变化，验证 miR-130a过表达荷

瘤小鼠生长迅速。

监测小鼠中分子指标变化:外泌体抽提试剂盒提取小鼠血清外泌体，RT-

PCR验证各组中 miR-130a变化;检测小鼠移植瘤组织 miR-130a 及 c-MYB表达，免疫组织化学染色CD31，用于检测各组移植瘤中血管生成情况。

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RXYWX.2022.4.26