超详细| 手把手教你做PCR实验

1，材料

a，

b，一段已知的目的基因序列

c，通过软件获得的一个GC含量数据分析

2，设计实验

a，正常引物

b，正向扩增引物

c，通用引物，两个模板被此引物测出了序列

d，设置了负对照，通过正常引物扩增，只是将模板换成水

3，操作

a，拿加样枪要稳，加样要准，充分混匀

b，标记组名，放入机器操作

c，设置

退火温度根据gc含量决定的

延伸时间由所扩增的基因片段长度决定的

d，反应结束取出

e，取1ulloading buffer置于点样板上

再加4ul待检测样品与其充分混合

f，取5ul混合好的样品点到琼脂糖凝胶样孔中进行凝胶电泳检测

g，设置电泳条件为220v，7min

h，结果

4，注意

a，反应程序参数设置，先用相应软件分析序列，得出理论值需要注意

b，模板是已知质粒

c，粒子，多条引物混在一起，需要扩增两轮

未知的序列扩增需要设置很多的平行对照

e，凝胶电泳里EB溴化乙锭是剧毒