取材-包埋-冰冻切片-免疫荧光染色IF

取材：这一步就是取你自己想染的组织了，病人的，小鼠的等等

取下来就可以了，我这里用的是做成球实验的小球【成球实验的步骤我还没更(^///^)】

 先就这样记录着吧

包埋：1.先把皿中的小球吸到离心管中（胶有点粘，建议把枪头剪一下再洗）

            2.加1ml或者2mlPBS  1000rpm，5min洗一次（勿吹打，小球会散）

            3.加4％多聚甲醛常温固定一小时

            4.加1mlPBS1000rpm，5min洗一次（勿吹打，小球会散）

            5.滴加包埋OCT冰冻包埋剂

            6.准备好包埋模具，不要混匀（因为球比较小且少，混匀的话，会直接无了），直接快准狠的吸出来滴到包埋模具中

冰冻切片：就是切片，操作那个冰冻切片机

免疫荧光染色：

            1.从-80拿出切片，拿出即用免疫笔画圈（因为不是组织，会找不到位置）

            2.室温放置10分钟

            3.PBS洗三次

            4.加破膜剂（0.1％的PBSTx）10分钟，然后PBS洗两次

            0.1％的PBSTx：PBS加0.1％的Triton X-100

            5.加5％的BSA（用0.1％PBST配的）常温封闭一小时

            0.1％PBST：PBS加0.1％的吐温

            6.  加一抗，37°30min

            7.  PBS洗三次

            8.加二抗，37°30min

            PS：二抗带荧光要注意避光，防止猝灭，有一些一抗是自带荧光的，不需要二抗，如果是多重免疫荧光的话，

                 注意波长不要重叠，还有就是种属问题

            9. PBS洗三次

           10.加dapi封片