DNA电泳常见问题

一、DNA带缺失

 

原因：①小DNA带走出凝胶

解决方式：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

 

原因：②分子大小相近的DNA带不易分辨

解决方式：增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度

 

原因：③DNA变性

解决方式：电泳前请勿高温加热DNA链，以20mMNacl Buffer稀释DNA

 

原因：④DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适

解决办法：在脉冲凝胶电泳上分析

 

二、DNA带模糊

 

原因：①DNA降解

解决办法：避免核酸酶污染

 

原因：②电泳缓冲液陈旧

解决办法：电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低。pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

 

原因：③所用电泳条件不合适

解决办法：电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15摄氏度；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

 

原因：④DNA上样量过多

解决办法：减少凝胶中DNA上样量

 

原因：⑤DNA样含盐过高

解决办法：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

 

原因：⑥有蛋白污染

解决办法：电泳前酚抽提去除蛋白

 

原因：⑦DNA变性

解决办法：电泳前勿加热，用20mM NacI缓冲液稀释DNA

 

三、不规则DNA带迁移

 

原因：①对λ/Hird 11I片段cos位点复性

解决办法：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟

 

原因：②电泳条件不合适

解决办法电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液

 

原因：③DNA变性

解决办法：以20mM Nacl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热

 

四、带弱或无DNA带

 

原因：①DNA的上样量不够

解决办法：增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低

 

原因：②DNA降解

解决办法:避免DNA的核酸酶污染

原因：③DNA走出凝胶

解决办法：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

 

原因：④对于EB染色的DNA，所用光源不合适

解决办法：应用短波长（254nm）的紫外光源