Day7——ADAMTS-7抑制损伤动脉再内皮化并通过切割血栓反应蛋白-1促进血管重塑
今天读的是孔老师关于ADAMTS-7的第二篇文章。
昨天那篇讲的是ADAMTS-7介导损伤动脉平滑肌细胞迁移和新生内膜形成，具体是ADAMTS-7降解COMP，使平滑肌容易迁移。
今天这篇是ADAMTS-7的另外一个作用，抑制损伤动脉再内皮化并通过切割血栓反应蛋白-1促进血管重塑。
看不懂诶，介导新生内膜形成/抑制再内皮化不矛盾吗？
再内皮化的概念：等于快速内皮修饰，大概是快速的修复对血管是有利的，可以减少斑块形成。
再狭窄的发生可能是因为药物洗脱支架不仅抑制平滑肌迁移，还抑制了再内皮化。因此需要一种策略，不仅抑制平滑肌迁移还促进再内皮化。
这篇研究主要的工作是发现ADAMTS-7不仅激活VSMC，还通过一种不依赖于COMP的机制抑制损伤后内皮细胞的恢复。
Result1：Adamts7 - / -小鼠是可存活的，不显示任何明显的表型
Result2：Adamts7 - / -小鼠的大规模表型分析
好怪，建立动物模型也可以作为两个结果
利用β-半乳糖苷酶的WB和染色证明ADAMTS-7的成功敲除。这些全敲除小鼠是可育的，生命参数、超声心动图、组织病理学、肺功能均正常。
Result3：ADAMTS-7缺乏促进颈动脉再内皮化并改善新内膜形成
用钢丝损伤颈动脉，通过埃文斯蓝染色来量化再内皮化。可以看到ADAMTS-7缺陷小鼠再内皮化程度更高，并且新内膜面积更小。
Result4：ADAMTS-7在体内和体外抑制EC增殖
用溴脱氧尿苷法反应内皮增殖情况，ADAMTS-7缺陷小鼠损伤后三天的增殖情况明显更好。
过表达ADAMTS-7可以抑制细胞增殖
而ADAMTS-7的中和抗体能够剂量依赖性地逆转ADAMTS-7对EC增殖的抑制作用。
Result5：ADAMTS-7抑制EC迁移
细胞迁移是再内皮化的重要步骤，于是接下来评估了过表达ADAMTS-7后细胞的迁移能力。过表达后迁移能力降低。下面左图是体外划痕实验，右图是改良的Boyden室测定。
而ADAMTS-7中和抗体显著消除ADAMTS-7的抗迁移作用。
Result6：COMP不影响EC的增殖/迁移
对HUVEC细胞，补充COMP之后增殖/迁移能力不变。COMP敲除小鼠与WT小鼠动脉损伤后再内皮化程度无显著差异。因此，ADAMTS-7可能通过COMP不依赖的机制抑制EC恢复。
Result7：用分泌组分析鉴定一种新的ADAMTS-7底物
在VSMC中腺病毒过表达ADAMTS-7，收集上清液分析蛋白组学。
血小板反应蛋白-1（TSP-1）是第一个被发现的内源性抗血管生成蛋白，能够抑制EC的增殖和迁移。过表达ADAMTS-7之后，上清中TSP-1减少，而ADAMTS-7敲除小鼠中TSP-1增多。这表明ADAMTS-7确实影响了TSP-1水平。
Result8：ADAMTS-7与TSP-1相关
接下来验证了ADAMTS-7与TSP-1的相互作用。co-IP证实二者可以互相结合
在HUVEC和COS-7中进一步证实。
在Eahy926细胞中转染TSP-1全长和ADAMTS-7的不同缺失突变体，进行杂交实验，找到了结合位点是在C端。
这一部分证明了无论是在体内还是体外，ADAMTS-7均能与TSP-1结合。
Result9：ADAMTS-7体外降解TSP-1
过表达ADAMTS-7，在全细胞裂解液中，全长TSP-1减少。
上清中TSP-1也减少。特殊的是在上清中观察到了140kDa片段，这在细胞裂解液中没有。
保持TSP-1，增加ADAMTS-7，全长TSP-1减少，而140kDa的TSP-1增多。
保持ADAMTS-7，增加TSP-1，碎片增加。
用ADAMTS-7抗体处理，TSP-1碎片消失。右边的是ADAMTS-7催化结构域的特异抗体。
Result10：ADAMTS-7通过TSP-1抑制再内皮化
SiRNA敲低TSP-1，细胞计数和细胞周期分析表明，ADAMTS-7对细胞增殖的抑制作用被缓解。
对迁移作用的抑制被缓解
对再内皮化的阻滞作用被缓解。
Discussion
1. ADAMTS-7敲除小鼠的脂质代谢变化
2. TSP-1不参与ADAMTS-7介导的VSMC迁移
3. ADAMTS-7可能优先靶向EC TSP-1。然而，我们不能排除ADAMTS-7在ec和vsmc中降解TSP-1的可能性
4. 需要进一步研究ADAMTS-7对TSP-1的裂解位点，以及裂解片段对EC功能和血管修复的生物学功能。
5. 与ECM中TSP-1的低水平相比，上清中TSP-1或片段的量越大，可能对EC细胞起更重要的作用。
这篇文章想说明的问题：一方面，ADAMTS-7通过COMP的降解促进VSMC迁移。另一方面，ADAMTS-7对TSP-1的降解导致产生具有生物活性的TSP-1片段，这些片段可能介导延迟的再内皮化并促进新内膜的形成。
这说明TSP-1具有双重作用，是很好的治疗靶点，因此在2023年孔老师组又发了一篇关于ADAMTS-7的动脉粥样硬化疫苗。明天再看qwq
