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七分钟浅学流式细胞术实验操作,本视频包括流式细胞术实验所需器材和试剂,样品处理,

2023-09-07 16:37 作者:菜鸟博士_杂货铺  | 我要投稿

实验器材和试剂,流式细胞仪、离心机、一液器、12孔细胞培养板、一次性无菌巴氏气管、15毫升无菌离心管、1.5毫升无菌离心管、300墨滤网、10%胎牛血清的1640细胞培养液、PBS缓冲溶液、NU6和卡苏米细胞四种流式抗体。实验过程,在超进工作台内准备两个15毫升细胞离心管,分别标注为K和N,放在试管架上备用。将培养的卡苏米细胞悬液加入标记了K的离心管中,将培养的那六细胞悬液加入标记了N的离心管中,平衡后将。两管细胞悬液,室温下500支离心五分钟,超净工作台内气上经验,每管再加入五毫升的细胞培养液,重悬细胞,将细胞悬液加入细胞培养瓶。二氧化碳培养箱培养,按上述步骤隔天更换培养液,继续培养二至三天,致细胞处于对数生长期,镜检细胞状态良好备用。

取两个15毫升离心管,标记K和N,分别将培养好的卡苏米和拉姆六细胞悬液加入标记有K和N离心管中500支,离心五分钟气上精液,用遇冷的PBS离心洗涤细胞两次2000转,离心五分钟,弃上清液。




500微升PBS重悬细胞取100微升细胞悬液,用流氏细胞仪进行细胞计数,调整细胞密度为1.0乘十的六次方,

每毫升取100微升卡苏米细胞与标记为K的1.5毫升离心管中取100微升囊六细胞与标记为N的1.5毫升离心管中选取四种荧光标记的抗体中的任意两种进行组合,进行相关表型的检测。


本实验需要做四种表面抗原的检测,如果每次检测两种抗原,四种抗体一共可以有六种组合方式,如选择A组合检。检测了细胞表面抗原CD13CD22,那接下来正确的选择应该是,一组合检测CD19CD33,其他同理,B和F组合,C和D组合。将K和N离心管中分别加入选定的抗体组合CD13CD22各五微升室温避光浴15到20分钟,用遇冷PBS离心洗涤细胞三次,每次一毫升,2000转离心五分钟。气上精液取300微升PBS。重悬细胞取上述两种细胞悬液过300目滤网与两个新的离心管中备用,同样另取两管培养好的卡苏米和囊六细胞悬液500支,离心五分钟,系上心液,用遇冷的PBS离心洗涤细胞两次2000转,离心五分钟。选取另一组荧光标记抗体组合CD19和CD33,取密度为1.0乘十的六次方每毫升的卡苏米和NUMBER6细胞血液各100微升,分别置于K管和N管中,每管加入CD19和CD33荧光标记抗体。室温避光伏日15到20分钟,用遇冷PBS离心洗涤细胞三次,每次一毫升,2000转离心五分钟,气上清液300微升PBS重悬细胞系上兴液。300微升PBS重悬细胞,取上述两种细胞悬液,分别过300目滤网与两个新的离心管中备用。




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