脑声常谈：小鼠恐惧记忆形成的神经机制 | 条件性场景恐惧实验

实验方法 

• 场景前置性条件恐惧记忆测试 

包括３个 部分。①前置场景：即场景的提前接触。将老年及成年小鼠各 １５ 只分别置于测试 盒内停留 ５ ｍｉｎ。 ②即刻电击训练：前置场 景２４ｈ后，将 小 鼠 置 于 同 一测试盒内，并在５ｓ内给予快速的足底电击 （２ｓ， ０．７５ｍＡ），电击结束后小鼠在测试盒内停留１ｍｉｎ 后放回饲养笼。③测 试：足 底 电 击２４ｈ后，再 将 小 鼠置于同一测 试 盒 内 停 留３ｍｉｎ，测试其对该场景 的恐惧反应。在实验过 程 中，取 Ｃ５７Ｂｌ６Ｊ野 生 型 老 年小鼠及成年小鼠各１５只，分别给予场景前置性条 件恐惧记忆测试；老年及成年小鼠各１５只，雌雄各 半，随机分为两组，实验组（ｎ＝８）在场景前置前和即 刻电击前２０ｍｉｎ分别给予４－ＡＰ（１ｍｇ／ｋｇ）急性腹 腔注射，对照组（ｎ＝７）则在相应的时间点给予等量 的生理盐水腹腔注射，分别给予场景前置性条件恐惧记忆测试。

条件性恐惧实验，型号：XR-XC404，上海欣软

• 条件性场景恐惧记忆测试 

包括两个部分。 ①训练：将小鼠置于测试盒内，２ｍｉｎ后给予足底电 击（２ｓ，０．７５ｍＡ），电击结束后让小鼠在测试盒内 停留３ｍｉｎ后放回饲养笼。②测试：３０ｍｉｎ及２４ｈ 后，将小鼠置于同一测试盒内，测试其对该场景的恐 惧反应。实验过程中，取老年小鼠３０只，随机分为两 组。实验前２０ｍｉｎ，实验组（ｎ＝１５）给予４－ＡＰ（１ｍｇ／ ｋｇ）急性腹腔注射，对照组（ｎ＝１５）给予等量的生理盐 水腹腔注射，分别进行条件性场景恐惧记忆测试。

• 条件性声音恐惧记忆测试 

包括两个部分。 ①训练：将小鼠置于测试盒Ａ内，２min后给予声音刺激（2800Ｈｚ，85ｄＢ，30ｓ），28s后给予足底电击 （2s，0.75 ｍＡ），电击与声音 刺激同时结束。小鼠在测试盒内停留1min后放回饲养笼。② 测试： 30min及24h后，再将小鼠置于另一新的测试盒Ｂ内，2min后给予同样的声音刺激，声音刺激持续 1min，测试其对该声音的恐惧反应。实验过程中， 取老年小鼠３０只，随机分为两组。实验前20ｍｉｎ， 实验组（ｎ＝１５）给 予 ４－ＡＰ（1mg／kg）急性腹腔注射，对照组（ｎ＝１５）给予等量的生理盐水腹腔注射， 分别进行条件性声音恐惧记忆测试。

检测指标 

采用条件恐惧记忆测试系统及分析软件（购自 上海欣软，VisuTrack动物行为分析软件），测试中自动记录小鼠的僵直时间（小鼠对该场景有恐惧记忆，则会表现出自发活动减少或停止，一切自发活动停止的时间连 续超过１ｓ，称为僵直时间）及总测试时间，采用僵直 时间占总测试时间的百分比（僵直时间％）来表示小鼠的恐惧程度，僵直时间长短与恐惧记忆的强弱呈 正比。基础僵直时间％：实验开始时，在前置场景中，小鼠放入测试盒内，所测得其在该场景内的僵直 时间％；电击后僵直时间％：对小鼠进行电击后，所测 得的其在该场景内的即刻僵直时间％；３０min或２４ｈ后僵直时间％：３０min或２４ｈ后，再将小鼠置于同一 测试盒内，所测得的其在该场景内僵直时间％。

以前的研究表明，与场景前置性条件恐惧记忆 的形成绝对依赖于海马不同，传统的条件性场景及 声音恐惧记忆的形成依赖于海马及杏仁核神经环路，海马受损时仍可依赖杏仁核的功能来形成 完整的对特定场景的恐惧记忆。依据这一特点，本文观察了老年小鼠条件性场景及声音恐惧记忆能力，结果显示，老年小鼠的基础僵直时间％、30min后以及24h后僵直时间％比较差异有显著性，说明 老年小鼠无条件性场景及声音恐惧记忆障碍。同时，本文结果还显示，腹腔注射４－ＡＰ对老年小鼠条件性场景及声音两种形式的短期恐惧记忆（30min后僵直时间％）及长期恐惧记忆 （24ｈ后僵直时间％）均无影响。说明老年小鼠可以依赖杏仁核来 完成对传统的条件场景及声音恐惧记忆，随着年龄 的增加海马受损对该记忆的形成无影响；并且４－ＡＰ对老年小鼠这两种场景记忆的形成无作用。

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