新型冠状病毒的自述（下）

别怕，别给“我”机会就好？

人类愈来愈恐慌了，我得意的笑，得意的笑……

为啥对付我这么难呢？当然是因为我很温柔的啦。被我接触过的人类，好多表面上没有任何变化，跟健康人类一样一样的，这些人类带着我四处浪，让我见识大千世界的美丽，也认识越来越多的人类；有些人类有轻微的感冒症状，这些人类特别坚韧，以为稍微坚持坚持就没事了，他们继续工作、聚会，直到我在他们的身体中肆意侵略，让他们的肺不胜重荷；还有一类人对我特别敏感，一见钟情，最终归于我的怀抱。当然人类的智慧是不容小视的，我被围追截堵，也有一点狼狈了呢。不过，千万别给我机会哦，因为我有保护色， 现在的核酸检测假阴性问题让我一次又一次成了漏网之鱼。那么是技术不过关还是我太狡猾？

其实“我”也害怕？

核酸检测主要有两种方法：一种是基于深度测序的宏基因组测序(mNGS)，我的堂兄SARS病毒品远高于我，那时人类可没有这么先进的技术，而我一露面就被一览无余。这种方法的使用有一定的局限性，步骤较多，周期较长，对操作者的要求也高，病人可等不了这么久，用作诊断不太合适。

检测流程如下▼

而核酸定量检测技术(RT-PCR)是一个非常成熟的技术，灵敏性、检测限都非常棒，用作诊断更具实操性。更何况我的序列早就公布于世，设计引物或者探针都非常的方便。可惜检测难点不在于此，关键在于我的载量很低，跟宿主的核酸量相比就像一滴墨水滴入一杯水中，可想而知检测的准确性和难度如何。在平常的核酸定量中Ct≥35，可信度降低，结果供参考；而在检测我的时候，有的检测试剂盒约定Ct≤38，则为阳性，有试剂盒约定不大于40为阳性。检测为阳性，可以确诊，可是检测为阴性就不一定是真的阴性哦。

RT-PCR与mNGS原理对比示意图▼

如何得到“我”？

不管哪种核酸检测方法，采集标本是关键的关键。怎么有效得到我去研究呢，请看：

A、鼻拭子标本

采集病人发病3日内的鼻拭子标本，用无菌植绒拭子采样，将拭子贴鼻孔壁慢慢转动进入病人一鼻孔内，至鼻腭处，然后边擦拭边旋转慢慢取出。以同一拭子擦拭另一鼻孔；迅速将纤维拭子放入装有2ml裂解液（与核酸提取试剂盒中裂解液相同）并贴有条形码的标本管中，在靠近顶端处折断无菌拭子杆，旋紧管盖并用封口膜封闭。

B、咽拭子标本

采集病人发病3日内的咽拭子标本，用无菌植绒拭子采样，适度用力拭抹咽后壁部位，应避免触及舌部；迅速将无菌纤维拭子放入装有2ml裂解液并贴有条形码的标本管中，在靠近顶端处折断拭子杆，旋紧管盖并用封口膜封闭。

C、痰液标本

收集深部咳嗽痰液或抽吸痰于一次性无菌旋盖采样杯中，采样杯预先贴好条码，采样杯中装入2ml生理盐水。

D、肺泡灌洗液（BALF）

由临床医生无菌操作下吸取10ml～20ml BALF（≥5 ml）到贴有条形码并带螺帽无菌容器中。

E、粪便标本

如患者发病早期出现腹泻症状，则留取粪便标本3-5g(黄豆大小),标本收集于含2ml生理盐水并贴有条形码的带螺帽标本采集管中。

F、血液标本

使用含有EDTA抗凝剂的真空釆血管采集血液标本2-4ml。

咽拭子和鼻咽拭子可直接用于核酸提取，当实验室条件不够时可增加病毒灭活步骤。血液标本，需要取血浆提取核酸。对痰液、肺泡灌洗液和大便标本应充分振荡混匀后进行病毒灭活（水浴箱预热至56℃，将需要灭活的标本从密封袋中取出，放入水浴锅中的试管架上，标本盖上搁置重物防止标本采集管漂浮。每隔10min将标本摇匀一次，灭活时间40min）　痰液或肺泡灌洗液中如果有浓痰无法吸样时，可尝试进行液化处理，在灭活标本中加入4倍体积4% NaOH,室温放置10min, 12000rpm离心5min,去上清后加入生理盐水悬浮，12000rpm离心5min，去上清后再用生理盐水悬浮，12000rpm离心5min，去上清后留约200μL用于核酸提取。

切记，切记，这样来收集我可以提高检测成功率哦。

而核酸提取等后续的检测都有对应的商品化试剂盒。似乎并不复杂，对吧？

听说“坦白从宽”？

为什么我这么坦白呢？因为精通核酸检测的大部分专业人员被迫隔离而停工，或者由于没有专业的防护实验室而无法开展检测。而医护人员更精通治病救人，在核酸检测方面略逊一筹。我在细胞内的繁殖速度超快，不易被消灭；一旦我被脱去外衣（提取成RNA）后变得极其脆弱，很容易被环境中的RNA酶降解。含量低稳定性差，被检测为阴性就太理所当然了。

但我似乎也不能高兴的太早了，听说新英格兰杂志发表的文献中，已经给出感染后抗体的变化规律（包括IgM和IgG）。虽然抗体的生产比核酸定量检测试剂盒难多了，但现在全球都在加紧研发进度，攻克难题指日可待。待那时我可能会潜伏起来，等待新的机会……

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原文源自欧易生物微信公众号