西尼罗病毒胞膜蛋白ELISA检测试剂盒操作手册

病原学西尼罗病毒属于黄病毒科黄病毒属，与乙型脑炎、圣路易脑炎、黄热病、登革热、丙型肝炎等病毒同属。有囊膜，单链线形核糖核酸，RNA为正链，约有10000～11000个碱基对，具有感染性。电镜下该病毒呈中等大小，直径21nm～60nm,圆形颗粒，对有机溶剂，紫外线敏感。

西尼罗病毒是一种基因组约为11kb的单股正链RNA病毒。该病毒基因组5’端为结构蛋白区，3’端为非编码区。这种RNA可 直接作为mRNA而翻译成多肽，并在病毒和细胞内蛋白酶的共同作用下被切割成3种结构蛋白（衣壳蛋白C、胞膜蛋白E和膜蛋白prM/M）和7种非结构蛋白（NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5）。其中E蛋白在西尼罗病毒的生命周期中起着重要作用，也是产生中和抗体的主要病毒蛋白。由于E蛋白可以介导病毒附着以及病毒和宿主的融合，并且大多数中和抗体是针对E蛋白上的抗原表位产生的，因此E蛋白是目前西尼罗病毒疫苗开发的最佳研究靶点。

西尼罗病毒最初是1937年从乌干达西尼罗地区一名发热的妇女血液中分离出来而被发现，因此得名为西尼罗病毒。西尼罗河病毒是一种脑炎病毒，以鸟类为主要的贮存宿主，马、蚊子和人都可以是它的传染宿主。人类感染西尼罗病毒后并不互相传播,通常为隐性感染.潜伏期为3～15天.目前还没有针对西尼罗河病毒的特效药，保护人类的相关疫苗也尚未问世。预防西尼罗病毒最好的方法是避免被蚊子叮咬，外出时最好穿长袖衣服和裤子，并使用驱蚊剂和防蚊贴。

艾美捷丨Cell Biolabs的 西尼罗病毒胞膜蛋白ELISA检测试剂盒，方便快捷，助力科研。检测原理如下：

抗WNV E蛋白的抗体被吸附到微量滴定板上。样品或标准品中存在的WNV E蛋白与吸附在平板上的抗体特异性结合；添加生物素标记的抗WNV E蛋白抗体，与捕获的抗原WNV E蛋白结合。

在孵育和洗涤步骤之后，加入HRP偶联的链霉亲和素，与生物素标记的抗WNV E蛋白抗体结合。在洗涤步骤中去除未结合的链霉亲和素，将与HRP反应的底物溶液添加到孔中。

有色产物的形成与样品中存在的WNV E蛋白的量成比例。加入酸终止反应，并在450nm处测量吸光度。用标准品WNV E蛋白制备标准曲线，然后确定样品WNV E蛋白浓度。

西尼罗病毒胞膜蛋白ELISA检测试剂盒样品的制备和灭活：

1.（可选）根据需要在培养基中稀释病毒上清液。对于未知样品，可以为每个样品推荐几种稀释液。包括培养基作为阴性对照。

2.将225µL每个样品转移到含有25µL裂解溶液的微量离心管中。

3.在室温下培养60分钟。：

西尼罗病毒胞膜蛋白ELISA检测试剂盒化验方案：

1.向抗E蛋白抗体中添加100µL WNV E蛋白未知样品或标准品镀膜板。每个WNV E蛋白未知样品、标准品和空白品应在实验室进行分析复制

2.在室温下在轨道振动筛上培养1小时。

3.用250µL 1X清洗缓冲液清洗微孔板条3次，每孔彻底抽吸在每次清洗之间。最后一次清洗后，清空微孔，并将微孔条轻敲在吸水垫或吸水垫上用纸巾去除多余的1X洗涤缓冲液。

4.向每个孔中添加100µL稀释的生物素化抗WNV E蛋白抗体。孵育在轨道振动筛上室温下放置1小时。

5.根据上述步骤3，清洗带槽3次。

6.向每个孔中添加100µL稀释的链霉亲和素酶结合物。在室内孵化在轨道振动筛上加热1小时。

7.根据上述步骤3，清洗带槽3次。立即进行下一步。

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