关于荧光标记的知识

1、什么是FRET检测法
可以利用荧光共振能量传递(Fluorescence resonance energy transfer，FRET)原理进行检测，在合成的蛋白酶底物多肽两端分别标记荧光发光基团EDNAS和荧光猝灭基团DABCYL。EDNAS在355nm光波激发下能够发出最大发光波长为490nm的荧光，而猝灭基团DABCYL能够吸收荧光，其最大吸收波长也是490nm。当蛋白酶底物完整时，发光基团发出的荧光被猝灭基团吸收，整个反应体系不发光；当蛋白酶底物被切割后，发光基团离开猝灭基团，猝灭效应降低甚至消失，反应体系发出荧光。

2、常用的荧光基团和淬灭基团组合有那些？
DABCYL/ EDANS，DABCYL/6-FAM，TAMRA/6-FAM，Abz/Tyr(3-NO2), Mca/Dnp

3、荧光修饰在序列中，在C端修饰时的方式有那些？

通常荧光染料化合物带有羧酸或者NHS活化酯，所以与多肽接合时需要多肽有氨基官能团，所以通过在序列中可以修饰在Lys侧连氨基上，在C端时需要增加Lys或通过乙二胺（ED：NH2CH2CH2NH2）连进行连接。如Lys（Biotin），ED-Biotin，EDDnp等。