肝硬化动物模型【疾病动物模型代做】

肝硬化动物模型【疾病动物模型代做】

【造模机制】CCI 经肝微粒体细胞色家 Pao激活生成三氧化碳(--{CCl),攻击肝细胞膜的磷脂,引起脂质过氧化破坏膜性结构;—CCI,还与蛋白质形成共价键,损害线粒体使还原性辅酶 A(NADH)与三磷腺苷(ATP)在肝内生成减少,脂肪酸氧化受到抑制,影响三羧酸循环致肝细胞“窒息”死亡:内质闷受损则脂蛋白合成障碍,甘油三酯和脂肪酸在肝细胞内蓄积。反复应用 CCI 损害肝脏,肝脏“损害-修复-损害”,并最终形成肝硬化。

【造模方法】

1.小鼠模型用 40%CCL 橄榄油 0.4ml,一次性口服可诱发小鼠肝小叶中央坏死，CCl油剂皮下注射 1～3ml/kg,每周 2次,肝硬化可在 12～15 周形成。

2.大鼠模型 SD大鼠腹腔注射 30%CCI 溶液 2.0m/ke,每周 2次,共7周形成肝硬化模型。用 CCLO.05m/100g 做皮下注射,可诱发大鼠脂肪肝、肝硬化;用 CCL0.2ml/100g 做皮下注射,可诱发大鼠肝细胞水疱样变性,缺氧、肝小叶中央坏死;用 QCL 矿物油 0.033m/100g、做腹腔注射,可诱发大鼠脂肪肝、肝小叶中央坏死;用 CC1,0.5～1.0ml/只一次性口服,可诱发大鼠肝小叶中央坏死;用 CCLO.5ml/kg一次性灌胃,可诱发大鼠急性中毒性肝坏死。

3.家兔模型用 CCL1.2ml/kg 一次性口服,可诱发兔肝小叶中央坏死;用CCI1.0ml/kg一次性口服,可诱发兔急性中毒性肝坏死。

4.犬模型用 CCL 溶液按 0.12ml/kg,配以等量花生油,清晨空腹经腹腔注射,间隔3~4 天注射 1 次,每周注射 2 次,共注药 8 周,形成肝硬化。

5.猫模型用 CCL 0.3ml/kg 皮下注射,可诱发猫肝小叶中央坏死、脂肪肝。

【模型特点】CCL 进入体内 15 分钟即可引起肝细胞损害,至 48 小时达到高峰,随后进入修复阶段。间隔 3~4 天注药 1 次,即在一次染毒造成肝损害后的修复期再次给药,重复“损害-修复-损害”的过程,从而诱导肝纤维化和肝硬化形成。实验中大鼠成活率约为60%~80%。

【应用范围】该模型适合于肝硬化发生发展过程的动态研究。

【注意事项】

1.大鼠、小鼠模型 CCI 油剂造模剂量和给药途径依动物种类和造模严重程度不同而有差异。皮下注射过快吸收入全身循环系统,脑、肾毒性大,注射位置易发生浸润性脓肿和溃疡,故死亡率可高达 30％~40％。降低 CCL浓度可降低死亡率,亦可采用腹腔注射、灌胃,蒸汽吸人及拌于食物中快速口服等方法。腹腔内注射门静脉浓度高,肝硬化形成时间短,但死亡率较高(20％~35％);灌胃法亦可直接吸收入肝,但操作复杂,肠道反应大;蒸汽需快速吸人,呼吸道刺激大,动物不耐受,中枢毒性大,易污染环境和伤害实验人员。溶于少许食物快速口服,少吃多餐,挥发减少,浓度低胃肠刺激减少,但受动物食欲影响,剂量难掌握,实验终点不明确,周期长。

2.家兔模型兔用 CCI 造模剂量以 1.0ml/kg 较合适,1.2ml/kg 时,2～3 分钟内有20%～30％动物可造成急性中毒死亡。口服 CCL时,应防止误入气管。CCL 常配成乳剂使用,如要配成 10%乳剂,可取 5ml 植物油和 5g 阿拉伯胶,放在乳钵中研匀,再加纯 CCL,研匀,然后加蒸馏水 10~15ml 调成粗乳状,最后加蒸馏水,使总量达到 100ml,使用时摇匀。

3.犬模型采用 CCI 造模同时,要求营养要进行控制,用米饭搅拌猪油为饲料,喂饲量控制在每天 15g/kg 左右,猪油含量为 10%,并以10%乙醇水为唯一饮料。

【模型评价】用 CCL诱导中毒性肝纤维化和肝硬化动物模型是一种经典的造模方法。CCL,所致高胆固醇饮食大鼠肝硬化可靠且复制时间短,肝纤维化进展稳定,是目前国内外常采用的动物模型。

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