【质谱学堂】2022年交流群问题集（2）
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01：色谱柱平衡
Q（Jewel）：我想问个问题，我们现在用的色谱柱平衡时间一直在延长，之前10分钟基本上就可以平衡好，现在需要三四十分钟，不知道这是什么原因引起的？各位老师有遇到过类似的问题吗？
A(小小哆啦梦吧):首先要确保流动相脱气完全还有就是环境温度哈，如果这些都没有问题，我感觉主要还是跟你的色谱柱有关，新柱子填料的活性肯定相对比较好的，如果你走的是梯度，比较快的平衡方式，直接用你的方法进空针平衡，这样会快一点感觉，只是个人建议，仅供参考哈
02：液相问题
Q(AB):请问液相的流速不准 应该怎么解决...没有明显漏液?
A(冬子╃Waters & Sciex):单向阀，柱塞杆和密封。。;二元泵还是四元泵。二元就两个都测一下。。把正常的换到不正常的。。排查是单向阀还是柱塞杆和密封的问题。四元就只有拿好的配件测试了。。或者拆正常仪器的。。。
Q(AB):这些最近都换过了，单向阀只有出口阀没有换 ，入口阀是新的，密封圈也是新换的
A（肖灿）：你是怎么发现流速不准？称的还是流速剂？
Q(AB):用容量瓶看的
A(冬子╃Waters & Sciex):有一个判断方法哈，把流动相的瓶子里面的滤头提出来。吸一段小的气泡在管路里面，然后让泵一直运行，观察气泡。如果气泡稳定的往前走，可以有限考虑出口单向阀有问题。如果气泡来回走，那大概率还是入口单向阀的问题
Q(AB):请问 这个流速应该多大？想知道是什么原理..
A(冬子╃Waters & Sciex):正常运行流速。。吸液也排液的时候两个单向阀是一个开，一个关。。吸液，入口开，出口关，排液，入口关，出口开。。如果排液的时候气泡往回走，说明入口单向阀没有正常关闭。吸液的时候气泡不前移感觉应该是出口单向阀没完全关闭，导致吸液不正常。试试看，这个也没有细想过。。主要日常都是用的Waters。配件多，不行就拆个正常的仪器换一换。。测试一波就能确认问题了
Q(AB):试了一下 气泡是往前走的 是一下一下往前走 不是一直往前走的。请问是不是可以排查出口阀的问题
A(冬子╃Waters & Sciex):正常啊，吸液往前走，排液的时候气泡应该是不动的。。入口阀应该没啥事。
Q(AB):都是走的2毫升每分钟流速，A泵流速明显偏低了
A(冬子╃Waters & Sciex):把A泵和B泵的单向阀对换啊。二元泵先换入口，测一波，再换出口测一波。。要怀疑出口阀有问题。可以先换出口阀。一次换一个
03：样品中有机相占比
Q（楠）：各位大佬，我记得有法规规定，在生物样品分析中，配置标准曲线和质控样品时，血浆中的有机相比例不能大于5%，有知道哪个法规吗？
A(蜗牛):查查ICH M10有没有,有机相比例过高，空白血浆+标液就会发生蛋白沉淀
Q（楠）：看了，没看到。是的，我想看看法规原文，是说的必须，还是只是建议
A(蜗牛):业内就这么定的，不超过5%，有的2%，不纠结。
A(我爱吃虾):行业内的潜规则，法规上没有出处。可能在欧美生物分析会议（WRIB）上有提到过
A(THINK):我好像记得血浆里面的添加物体积不能超过10%。一般标准品都是50%甲醇稀释，这样一看还真就是不大于5%
04：有机试剂中的异常分子量
Q（陈军）：seen w/ silica capillary NanoSprayer 这句话精准翻译是什么？今天从制备乙腈中看到有个杂质，大量存在，分子量536，查资料是这句英文。我还看到了391，应该是塑化剂吧，这个。
A(我爱吃虾):没研究过。 高有机相冲仪器，看能降下来不
A(我爱吃虾):额，换质谱级的乙腈。也有嘛？
Q（陈军）：那就没有了，制备液相不至于这么奢侈
A(我爱吃虾):或者甲醇这些试剂，是不是也有。
一般碰见这种情况，
1.更换厂家或提高试剂级别
2.如果确认是质谱中有的，就接二通，全扫描模式高有机相比例冲质谱
3.叫工程师上门撸管子
A(我爱吃虾):要么是试剂本身，要么是容器，换个玻璃瓶存放。
05：胆汁酸液质方法残留问题
Q（花酱）：各位大佬，想请教一个胆汁酸定量中的问题，检测了几个胆汁酸，发现残留很严重，要走一针空白之后残留才好一些，已经把洗针液换成甲醇：乙腈：异丙醇：水了，洗针时间10s，还有什么办法可以降低残留呢？或者实在不行，可以每走一针样品走一针空白吗？这种操作有据可依吗
A(rainy):初始流动相的有机相比例调高一些
A(我爱吃虾):你确定是残留？而不是因为待测物为内源性物质带来的本底干扰。人体中可是有50多种胆汁酸，有的还同为同分异构体，你都分开了吗？
A(郑八只):请问确定残留的位置了吗？如果更换了多种洗针，都没有改善的话，考虑是不是残留在柱子上呢
Q（花酱）：不是呢，我走的标准品。对，就是考虑残留在柱子上了
A(郑八只):可以调高初始有机相比例，如果残留有改善的话，可能残留在柱子上。是走了标准品，随后走了溶剂，发现有残留；还没有上从基质提取的样品对吗？
Q（花酱）：怎么说呢，都走过，因为残留是走完样品接着走空白的时候发现的，然后再走一针空白，几乎就没有残留了
A(郑八只):那我那我觉得还有把残留调掉的希望！我们有的时候两针空白残留都下不了。如果怀疑和色谱柱有关的话，也可以尝试更换色谱柱，比如色谱柱从C18变成C8，保留能力下降
A(我爱吃虾):残留可能来源：①系统中的死体积所产生；②由于吸附（耗材，管路）导致的残留。③在色谱中不完全的洗脱形成的残留。
残留若无法消除，可以合理的安排样品顺序：如参考血药代谢曲线浓度，将低浓度样品安排在前，高浓度样品靠后的方式，或在高浓度样品后增加空白样品来减少残留
残留解决方法，还是需要了解化合物的性质合理配置洗针液，减少液相管路中的死体积等。一般多肽化合物或logP值比较高的小分子化合物在方法开发的时候就需要重点考察残留了。
A(THINK):是什么柱子？我测胆汁酸的时候从来没有残留啊
Q（花酱）：是BEH C18
A(郑八只):实际上我用C18，洗针用甲醇：水，也没有残留。也是测胆汁酸
A(LZH):基本没有残留的。主要考虑同分异构体的区分。
A(LZH):方法可以同时检测50种胆汁酸，其中包括30种游离型胆汁酸、8种甘氨酸结合型和12种牛磺酸结合型胆汁酸。不管从检测通量，还是从方法选择性以及方法灵敏度等方面看，这个方法都是帮你加速搬砖（胆汁酸）的不错选择。
特征谱图
50种胆汁酸及其内标的特征色谱图如下图2。从谱图可以看出，该方法可以基本实现50种胆汁酸的分离。另外，该方法大部分胆汁酸的LLOQ能达到0.08 nM水平。
图2. 30种游离型胆汁酸（A) 和20种结合型胆汁酸（B）及其同位素内标（红色）的色谱图
具体参考文献如下：https://doi.org/10.1021/ac503816u
06：大鼠胆汁酸采集
Q（甜甜）：谁采集过大鼠胆汁，一只大鼠能采多少毫升胆汁？
A(我爱吃虾):大鼠无胆囊，但胆总管较大，可用胆总管插管，收集胆汁，研究消化功能。
胆汁采集需要进行胆管插管手术收集，按时间段收集，在动物活体状态下，从胆管插管的管子中流出。一般活不过3天.一般24h有5-6ml
07：他克莫司稳定性
Q（临床质谱解决方案-谱芬生物）：请教下各位，他克莫司内标在甲醇乙腈中一段时间后降解的快吗
A(程):他克莫司，没有稳定性问题吧。是回收率有问题吧，要把红细胞给破碎掉，释放出药物。
A( ):他克莫司临床测了有20多年了吧，技术相当成熟了
A(程):他克莫司，一般是测全血。甲醇乙腈无法使红细胞完全破碎释放出药物，导致回收率偏低。一般要加 硫酸锌
08：色谱柱平衡
Q（Jewel）：我想问个问题，我们现在用的色谱柱平衡时间一直在延长，之前10分钟基本上就可以平衡好，现在需要三四十分钟，不知道这是什么原因引起的？各位老师有遇到过类似的问题吗？
A(小小哆啦梦吧):你的流动相是什么？
Q（Jewel）：千分之一甲醇水
A(小小哆啦梦吧):首先要确保流动相脱气完全还有就是环境温度哈，如果这些都没有问题，我感觉主要还是跟你的色谱柱有关，新柱子填料的活性肯定相对比较好的，如果你走的是梯度，比较快的平衡方式，直接用你的方法进空针平衡，这样会快一点感觉，只是个人建议，仅供参考哈
A（饼干）：平衡好是怎样判断的.压力？基线噪声？
Q（Jewel）：样本刚开始不出峰，直到重复进样多次后才出峰
09：流动相中有气泡
Q（zhouzhou）：想问问大家，为什么我的A相管路里面总是很多气泡？流动相配的时候，有超声排气泡，液相也有自动脱气机。刚开始管路不会有气泡，大概半个小时开始就会有气泡。另外，出峰时间总是飘来飘去，但是峰形不受影响，很好。
A（【Ai】i HoMe）：是不是放在空调出风口方位
A（收割机）：吸滤头脏了？
A（AB）：气泡那里出现？流动相到脱气机管路？还是脱气机出来到比例阀管路？
A（木字栎）：我也有这种情况
A（AB）：正常，水相多就是这样，你这个是管路外面，没啥
Q（zhouzhou）：到脱气机之前那一段，超声过。我的是在里面
A（冬子╃Waters & Sciex）：可以换个流路试试看，看看时候管路有关系，还是跟流动相有关系
Q（zhouzhou）：我重新配了几次，都是这样。我的峰飘来飘去，应该跟气泡也有关系吧？
A（海阔天空）：可以看一下管路通路有接口的地方，重新接一下，可能会有松动的地方，容易进空气，多purge一下管路，换一下过滤头。温度控制好，温度高的话管路溶剂容易挥发进空气
A（THINK）：不一定。你看到管道里面有气泡了吗？跟室温也有关系。可能得换。我以前也遇到过，有时候洗了有改善，有时候依旧这样
END
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更重要的是有N多大佬发大红包。。。。。
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