鲎试验法——用荧光测定检测细菌内毒素含量的方法

将荧光母素（fluorescamine)加入鲎试剂中，可使参与凝胶反应的蛋白分子被荧光素标记上。在形成凝胶的过程中，由于蛋白分子产生聚合结构变化，结合于蛋白的荧光素因部分蛋白随水分子运动而同时发生旋转，导致荧光偏光度发生变化。令荧光偏光度为P，垂直荧光强度为I1，水平荧光强度为I2，则可见Р值由于凝胶化而增加，其值可按下式求得如下图:

 Р值与标本中内毒素的含量呈线性关系。

实验时所用的荧光母素浓度常为0.02%。因为荧光母素浓度在0.05%以上时，聚合反应有明显的抑制，0.025%有轻微的抑制作用。

鲎试剂凝胶化，可以使P值增大，其反应潜伏期的长短与P值增大的程度取决于内毒素的浓度。当内毒素在10-2μg/ml时，5分钟内P值开始增大，而10-3μg /ml时，则在30分钟仍看不出P值的增大，当内毒素<10-3μg /ml时，浓度越小潜伏期越长。从而形成了P值上升的图像，据此可求出回归直线方程。

设倾斜度为b，潜伏期为t ，计算b/t值。如按不同浓度的标准内毒素计算结果绘成曲线，可见内毒素在10-8～10-3μg /ml范围内呈上升型直线，其相关系数为0.9804，方程式为:

Y = 0.0207 + 0.0797x

(R = 0.9804)

根据标准曲线，即可求出被检标本中内毒素的含量。

本试验的操作均在0℃进行，测定时则在25℃进行。应观察60分钟内反应的全过程，每隔5分钟测定一次。

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本文节选自：《内毒素的检测与鲎实验（二）》，文章作者：余庆。如有侵权，请联系删除，谢谢！