凝胶阻滞（实验简介,实验步骤）

一,凝胶阻滞实验简介：
※ 凝胶阻滞实验是通过检测质粒的结合能力以及脂质体,进而达到影响转染效率的结果。该实验一般应用于研究蛋白质的DNA以及蛋白质RNA的相互作用，在实验对照泳道过程中（不含蛋白质的DNA / RNA探针）将通过条带进而显现出来结果。

二,凝胶阻滞实验所需材料及试剂：
10ul白吸头(灭菌) ,0.5ml尖底连盖离心管 ,Agarose,过硫酸铵,丙烯酰胺

三,凝胶阻滞实验步骤：
1.聚丙烯酰胺凝胶的制备
（1）将干净的夹具,配板和垫片组装。用胶带密封侧面和底部（防止凝胶漏出）
（2）聚丙烯酰胺凝胶5％的制备步骤：

产品名称体积：MediumH2O78毫升39毫升10×TBE 5毫升2.5毫升30％丙烯酰胺（19：1）16.6 毫升8.4 毫升10％过硫酸铵1000 微升500 微升

（3）充分混合以减少泡沫的形成，加入10%的琼脂糖，100微升 / 50微升TEMED。

（4）混合后，将其倒入橡胶片中并插入梳子，约15分钟胶体凝固。
（5）凝固后，可以将凝胶包裹在塑料膜中放在4℃环境下保存。
2.准备5X结合缓冲液。
3.组合反应：
① 1微升poly-dIdC（1微克/微升）
② 2μl5x结合缓冲液
③ 1 微升标记探针+0.1微升100xBSA
⑤ 加入体积（微升）核提取物（总蛋白5ug）
⑥ 将H2O添加到10 微升总体积中
⑦ 加入适量抗体（使阻滞更加明显），在室温下30min。
4.在结合反应性自由基的过程中，将凝胶安装到电泳槽中，在150伏的0.5×TBE电泳缓冲液中预运行30min，然后在150 V的电压下加载样品和电泳2小时。
5.制作干胶（可选）：将胶转移到滤纸上。用胶水覆盖滤纸，并在80°C的真空干燥机中干燥1-2小时。
6.在暗室中挤压并曝光胶卷，并将胶卷放入暗盒中，暴露于-80°C。