高效液相色谱技术HPLC

今天小海星为大家介绍一下高效液相色谱技术，高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。

那么HPLC技术和经典常压色谱相比有什么区别呢？主要有以下特点：

1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次，大大缩短了纯化蛋白质的时间

2、分辨率高。一根长10cm的色谱柱可分离十几种以上的物质且高效相色谱柱可反复使用

3、适应面广，灵活性强几乎所有的蛋白质根据它们的性质差别（等电点、疏水性、分子量、电荷分布等）都可以用不同HPLC方法进行分离提纯

4、灵敏度高HPLC现已广泛采用多种高灵敏度的检测器，如紫外、荧光、电导等。荧光的灵敏度可达10-9g

5、重复性好在作分析蛋白质分析试验时，误差一般不超过5%。

6、分离纯化种类广在生物领域中广泛用于下列产物的分离和鉴定：氨基酸及其衍生物、有机酸、甾体化合物、生物硷、抗菌素、糖类、卟啉、核酸及其降解产物、蛋白质、酶和肽、脂类等 。

因此，HPLC在蛋白质分离纯化方面具有极其重要的位置。当然HPLC也有它的缺点，例如，仪器设备价格昂贵，虽然已有制备柱使用，但制备量还是受到限制，在某些方法中，由于使用有机溶剂，对蛋白质的活性会有一定影响。

总而言之，高效液相色谱技术现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法，是生物学科领域中重要的分离分析技术。

作者：海星生物

公众号：Cas9X细胞基因敲除

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