机制探究 | TGF-β信号通路通过CDR1as促进宫颈癌转移

研究背景

尽管宫颈癌筛查和使用HPV疫苗已被广泛使用，但由于转移性，宫颈癌仍然是全球女性癌症发病率和死亡率的第四大疾病。转移患者的总生存率仍然较差。因此，生物标志物预测对缓解病情进展至关重要。据研究，TGF-β通路已被报道与宫颈癌的转移有关。然而，其作用机制尚不清楚。

文献来源

中山大学孙逸仙纪念医院姚婷婷教授团队等在Molecular Cancer期刊上发表“TGF-β signaling promotes cervical cancer metastasis via CDR1as”一文研究成果，研究发现circRNA CDR1as分子过表达促进了宫颈癌的体内外转移，它通过促进IGF2BP1对SLUG mRNA的m6A甲基化调控，并稳定其不被降解，从而促进宫颈癌的转移。也就是说TGF-β信号通路通过CDR1as促进宫颈癌转移，这为宫颈癌治疗提供了潜在的靶点。

项目研究

EMT是肿瘤进展早期的标志之一，其信号维持严重依赖于TGF-β的激活。作者通过TGF-β激活剂处理Siha细胞，诱导产生EMT表型变化。借助circRNA芯片测序筛选出差异表达的circRNA，细胞水平检测circRNA CDR1as变化倍数最高。于是推测CDR1as参与了TGF-β通路诱导的宫颈癌转移。

临床相关数据显示，CDR1as在淋巴结转移中表达较高，与较短的总生存期和较差的预后相关。但是，CDR1as与肿瘤分级、分期和原发肿瘤体积之间没有显著的相关性。

在肿瘤细胞中过表达 CDR1as可以促进宫颈癌的转移，动物水平体内实验与此一致。CDR1as表达上调后，上皮标志基因E-cadherin表达减少，间充质标记基因N-cadherin和Vimentin波形蛋白表达增加，EMT调控转录因子Slug表达上调。

利用生物信息学手段进行预测，发现和miR-203可能与CDR1as/Slug存在互作关联。然而在pull down实验中，CDR1as探针并没有拉到Slug通路相关的miRNA，也就是说明Slug的激活可能不受miRNA海绵的调控。CeRNA机制走不通，研究者转从RNA与蛋白互作的角度探讨分子机制。RNA下拉分析寻找可能与CDR1as结合的潜在蛋白，发现在35kD~70kD之间存在几个单独的蛋白条带。结合生信显示IGF2BPs与CDR1as相互作用，Western blot检测到70 kDa条带与IGF2BPs 分子量相吻合。RIP 抗IGF2BP1显示CDR1as明显富集。以上结果表明，IGF2BP1可能是一个特定的潜在下游靶点。

基于IGF2BP1的m6A甲基化调控作用，进一步验证了IGF2BP1优先与Slug mRNA上的m6A修饰位点结合。沉默IGF2BP1也能抑制CDR1as促进的转移和侵袭潜能。综上所述，CDR1as与IGF2BP1特异性结合，以稳定和提高Slug的表达。

作者分析了CDR1as上调后的不同mRNA水平和m6A水平。KEGG和GO分析表明，CDR1as显著激活了TGF-β的信号，p-smad2和p-smad3表达增加。使用TGF-β抑制剂处理CDR1as过表达细胞，发现EMT表型被逆转，这表明CDR1as作为激活TGF-β信号通路和EMT促进宫颈癌细胞的转移。

作用机制

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