Fluo-4 AM,钙荧光探针

Fluo-4 AM,钙荧光探针是一种常用的检测细胞内 Ca2+ 浓度的探针。Fluo-4 AM is a cell-permeable, fluorescent Ca2+ indicator (Kd Ca2+ = 345 nM). Displays no resting signal and 100-fold increase in emission intensity upon Ca2+ binding. Excitation/emission λ 494/506 nm.

Fluo-4 AM实验步骤：
1、所需试剂：
※ 2 mM的 Fluo-4, AM（DMSO）试剂溶液，将1mg的Fluo-4, AM溶进442µL的DMSO中；
※ Pluronic F127； Hanks balanced salt solution（HBSS）
※ HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
2、实验步骤：
※ 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg的Pluronic F127，Pluronic F127可以防止 Fluo-4, AM在HBSS缓冲液中聚合，同时可以帮助其进入细胞；
※ 用 HBSS缓冲液 稀释 Fluo-4, AM溶液，制备出 4µM的Fluo-4, AM溶液；
※ 将制备好的Fluo-4, AM溶液加入细胞中，在37℃条件下培养约20分钟；
※ 加5倍体积且含有 1%胎牛血清 的HBSS缓冲液后，继续培养月40分钟；
※ 用 HEPES buffer saline进行洗涤细胞3次后，再用 HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制备成 1×105 cells/mL溶液。
※ 37℃条件下培养约10分钟，再该细胞进行荧光钙离子的检测。荧光波长：激发波长494nm，发射波长516nm。