外泌体标记Celltracker CM-DiI 活细胞示踪剂CM-DiI/Calcein, AM, Ultrapure 钙黄绿素

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外泌体荧光标记是外泌体功能研究中的必要的技术,然而在实际操作中对于使用多少的外泌体、加入多少的荧光染料、以及最终标记的效率是多少，这些问题都是不清楚的，给操作人员带来了不少困扰。

本研究目的是使用不同剂量的荧光染料标记外泌体,通过纳米流式仪检测外泌体荧光效率以及染色后外泌体重新纯化后的荧光效率。

实验方法:

1，细胞培养

293T细胞通过外泌体专用无血清培养基进行培养，收集细胞上清液，通过0.45 um滤器过滤处理。

2，外泌体分离提取

通过Umibio细胞上清液外泌体提取试剂盒的说明书进行操作，提取的外泌体通过纳米流式检测仪进行颗粒浓度和 BCA 方法进行蛋白浓度测定。

3，外泌体荧光染料标记

·配制染料工作液:用 DiluentC试剂（染色试剂盒自带）稀释染料储存液，配制浓

度为100 nM的染料工作液(PKH67);

·稀释染料工作液:按照﹖倍梯度通过Diluentc稀释100 nM的染料工作液;·向各实验组中加入10 uL对应浓度的染料，混匀后取10 uL进行纳米流式检测;·在标记的外泌体样品中补加入1 mL 的 PBs,使用试剂盒再次提取外泌体以去除游离染料;

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RXYWX.2022.4.27