裸鼠荷人成骨肉瘤骨髓腔原位移植模型【北京实验外包】

裸鼠荷人成骨肉瘤骨髓腔原位移植模型【北京实验外包】

【造模机制】人体肿瘤/裸小鼠系统是研究人体肿瘤的一种较为理想的模型系统。移植后的人体肿瘤在裸鼠体内不仅仍保持原有的组织形态及功能、特有的染色体核型、免疫学特点，而且也保持对抗癌药物和电离辐射的原有特性。以往多将肿瘤细胞接种于裸鼠的腋下或背部肩胛区皮下，按这种方式接种生长的肿瘤组织一般有包膜形成，较少发生远处转移，使肿瘤，特别是高转移潜能的肿瘤的生长偏离了其临床生长特性，因此这个模型不适于进行肿瘤的浸润生长和转移特性方面的研究。近年来人们提出了原位移植(orthotopic implan-tation）模型，即将肿瘤细胞移植到与肿瘤原发部位相同的组织或脏器中，使肿瘤的生长微环境更符合实际。将人成骨肉瘤组织植入（组织块法）或体外培养分离的成骨肉瘤细胞注入（细胞悬液法）裸鼠骨髓腔内，即可建立稳定的裸鼠荷人成骨肉瘤原位移植模型。

【造模方法】选用4 周龄健康 BALB/c 裸小鼠。取体外培养的人骨肉瘤细胞株 HOS 8603,按照 2×10°个细胞/只接种于裸鼠背部皮下,4 周后移植瘤增大至 2.0cm×2.0cmX 1.5cm，取无坏死瘤组织，置于盛有 RPMI-1640培养液的培养皿中，用眼科剪刀将其剪成直径约0.3mm大小的瘤组织块备用。再选用6周龄裸鼠，雌雄兼用，随机分组。0.5%戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔内麻醉，将裸鼠固定后暴露术侧下肢，75%的酒精消毒术野，在手术显微镜下取股骨下部外侧切口或胫骨粗隆前外侧切口，依次切开皮肤或皮下组织，显露股骨下部或胫骨上部干骺端。瘤组织块植入的方法有两种：①用电钻在此处钻孔造成直径约 2～3mm骨缺损，将上述剪碎的瘤组织块从骨孔填入（5~8块/只）尽量塞满骨髓腔；②用细套管针在与股骨或胫骨长轴成10°~20°角的方向钻人股骨干骺端或胫骨粗隆部位，当感觉到有落空感时将针分别向下或向上抬起接近 60°角,撬起一个小骨片形成一个通向骨髓腔的小洞，用套管针将瘤组织块送入洞内或直接将其填入洞中，将骨片恢复原位，4-0尼龙线缝合伤口。术后将裸鼠返回笼中并用无菌敷料覆盖以保持体温，直至其从麻醉中恢复，精心饲养观察。另一种方法是细胞悬液法，将体外培养的 HOS-8603 细胞系直接注射接种于裸鼠股骨下端骨髓腔内(5×10°/只)。造模 4～6 周即可出现肉眼可见的瘤组织。主要观察肿瘤生长状况，包括肿瘤的大体形态、重量和体积，肿瘤包块的病理学检查，大体观察肿瘤包膜、表面和切面颜色及瘤体质地，通过光镜观察肿瘤细胞的形态和分布，了解瘤体血管的增生与分布情况，电镜观察肿瘤细胞的细胞器及染色体形态改变等。

【模型特点】从植入瘤组织块或接种细胞悬液后第2周开始,骨局部开始增大，呈膨胀性生长，挤压周围组织，外观皮肤紫红色，静脉怒张。种植3~4周后X线片即可显示骨质破坏及周围软组织浸润，6周后可出现病理骨折。光镜下移植瘤细胞大小不一，形态各异，核大深染，核浆比例倒置，呈巢状分布。

【应用范围】本模型可用于肿瘤细胞生长、侵袭的生物学特性研究；用于骨肉瘤的定位显像诊断，保肢治疗研究；用于导向治疗载体和化疗药物敏感性筛选等方面的研究。

【注意事项】

1.实验应在超净台上进行并严格遵守无菌操作原则 裸鼠是无免疫力动物，抵抗力低下。其荷瘤模型实验周期较长，操作环节较多，过程复杂，故所有的操作均需在超净台上按无菌技术操作。

2.在裸鼠骨骼上操作应轻柔并将瘤组织块填满髓腔由于裸鼠的骨骼细小，其长骨的干骺端或骨端略有膨大可以利用，但此处骨皮质很薄，强度很低，在钻洞或撬开骨皮质时操作要轻柔以免钻穿对侧骨皮质造成骨折。将瘤组织块植入骨髓腔时，操作要准确，尽量把瘤组织块填满髓腔。

3.应严格按瘤细胞培养程序和操作规范要求进行实验本模型需体外培养并扩增人骨肉瘤细胞株 HOS-8603，要求严格按照体外培养程序与操作进行，还要做该细胞系的生物学特性参数测定，如肿瘤细胞生长曲线、贴壁率等。

【模型评价】本模型移植成功率较高（几乎均为100%），并且具有良好重复性。但用裸鼠为荷瘤载体，由于其价格昂贵且不便进行体外有菌操作治疗，使该模型有一定的局限性。

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