免疫沉淀技术介绍之IP

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是一种利用抗原和抗体特异性结合原理，探讨蛋白与蛋白、蛋白与DNA或RNA之间相互作用的经典方法，能够有效验证细胞内蛋白与其他生物分子的生理性相互作用，也可用于检测和纯化抗原，对目的蛋白进行定性和定量分析。因此，免疫沉淀技术根据检测目的不同，可分为免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）、染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）、RNA免疫共沉淀（RNA Immunoprecipitation，RIP）以及pull down实验。这几种方法的基本原理相同，但也各有特点和适用范围，小编将分期给大家一一介绍，本期先介绍下IP。

IP原理

     将含有目的蛋白的样品溶液与特异性抗体结合，该抗体的Fc片段又能结合到protein A/G上，protein A/G通常会固定在琼脂糖颗粒或磁珠上，进而达到吸附目的蛋白的目的，后续通过离心收集、洗脱、溶解等步骤分离获得目的蛋白。抗体可以预先固定在固相支持物（琼脂糖或磁珠上）；也可以先是游离状态时与目的蛋白结合后再结合到固相支持物上，回收抗原抗体复合物。

预固定抗体（A）和游离抗体（B）进行免疫沉淀的示意图

IP一般实验步骤

1. 收集细胞并使用IP裂解/洗涤缓冲液裂解细胞；

2. 可留取少量裂解液用于WB实验，其余的裂解液进行抗原抗体结合处理，形成抗原抗体复合物；

3. 免疫沉淀后，通过离心将protein A/G-beads沉淀，小心弃去上清；

4. 用裂解缓冲液洗涤protein A/G-beads 3-4次，每次洗涤后需离心；

5. 洗脱抗原抗体复合物，得到目的抗原；

6. 对目的抗原进行WB检测或质谱分析。

         以上便是对IP实验的介绍，简单的说，就是通过抗原-抗体特异性结合获得靶蛋白，然后通过WB或质谱对靶蛋白进行定量或定性分析，是免疫沉淀技术中较为简单的一种。下期将对其延申技术Co-IP进行介绍。汉恒生物专注病毒包装十余年，若有需求，欢迎大家咨询联系~