对-叠氮苯甲酰溴/精氨酸特异性交联剂/SPDP-PEG-CH2CH3COOH
SPDP修饰穿膜肽交联——制备穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其穿膜活性和酶活性。方法:采用异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺基-3-(2-毗啶二硫)-丙酸酯(SPDP)将穿膜肽一增强型绿色荧光蛋白融合蛋白(CPPs-ECFP)、β-葡萄糖苷酶进行共价交联,经N-NAT Superflow Cartridge ,Sephadex G-75层析柱分离纯化。采用还原型和非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PACE)对偶联物进行鉴定;偶联物与E细胞共同孵育,置于荧光显微镜下观察,鉴定其穿膜活性;采用β-葡萄糖苷酶测试盒(DBGD-100)鉴定其酶活性。
结果偶联物SDS-PACE非还原型电泳高分子量端可见明显条带,而还原型电泳分别在穿膜肽和β-葡萄糖苷酶分子量相应位置可见明显条带;在荧光显微镜下与偶联物共同孵育后的E细胞内可见绿色荧光;用β-葡萄糖苷酶测试盒(DBCD-100)测定,偶联物仍然保持良好的酶活性,约为同等浓度β-葡萄糖苷酶活性的80%。结论:应用SPDP成功制备了穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物,并且偶联物保持良好穿膜活性和酶活性。
产品名称:SPDP-PEG-CH2CH3COOH
状态:固体/粉末/溶液
产品规格:mg
保存:冷藏
储藏条件:-20℃
储存时间:1年
用途:科研
温馨提醒:仅供科研,不能用于人体实验
产品名称:精氨酸特异性交联剂
状态:固体/粉末/溶液
产品规格:mg
保存:冷藏
储藏条件:-20℃
储存时间:1年
用途:科研
温馨提醒:仅供科研,不能用于人体实验
产品名称:对-叠氮苯甲酰溴
状态:固体/粉末/溶液
产品规格:mg
保存:冷藏
储藏条件:-20℃
储存时间:1年
用途:科研
温馨提醒:仅供科研,不能用于人体实验
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瑞禧WFF.2022.12