Hoechst 33258染色实验(原理,介绍,步骤,所需试剂)

Hoechst 33258染色原理

Hoechst 33258 是一种细胞渗透性苯并咪唑染料，可与双链 DNA 的小沟结合，优先与富含腺嘌呤和胸腺嘧啶的序列结合。 当与活细胞或固定细胞中的 DNA 结合时，它会发出蓝色荧光（激发 352 nm/最大发射波长 461 nm），可用作细胞周期研究的细胞核标记物和区分凋亡细胞中的细胞核形态。

二、Hoechst 33258染色实验所需溶液的配制：
(1)Hoechst 33258储备液
Hoechst 33258 1mg
0．01mol／L的PBS(pH 7．4) 5ml
(2)Hoechst 33258工作液(终浓度为0．5μg／ml)
Hoechst 33258浓缩液 125μl
0．01mol／L的PBS(pH 7．4) 50ml

三、Hoechst 33258染色实验操作步骤
(1)细胞悬液或培养单层细胞等标本，用醋酸―乙醇或Carnoy固定液固定；
(2)0．01mol／L的PBS漂洗5分钟；
(3)Hoechst 33258工作液染色，室温放置15分钟左右；
(4)0．01mol／L的PBS漂洗3次，每次漂洗5分钟左右；
(5)用甘油与PBS比例为1：9的混合液或水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察。
结果：该染料为DNA的特异性荧光探针，细胞核呈亮蓝色荧光。