DSPE-PEG2000-D4磷脂靶向荧光脂质体的应用DSPE-PEG-D4/T7/cn
小胶质细胞是大脑的免疫细胞，是在胚胎发育初期由外周血中的巨噬细胞迁移进入脑组织，在脑组织中分化形成的。作为脑内的免疫细胞，其表面有很多受体表达，可以结合多种类型的分子结构。
针对肿瘤细胞表皮生长因子（EGFR）筛选出含有6个氨基酸的多肽配体。将含D4多肽修饰的荧光脂质体通过尾静脉注射到荷瘤小鼠体内，小动物活体成像发现荧光多肽脂质体不仅在肿瘤内有聚集，在脑内也有较强的荧光信号。
此外，有实验，用洛哌丁胺分子作为“探针”，DSPE-PEG2000-D4形成的胶束为载体，通过小鼠热水温浴缩尾和福尔马林致痛等药效学实验，发现D4多肽具有靶向载药胶束跨越血脑屏障的能力。
基于上述结果及小胶质细胞在血脑屏障中的结构和功能特性，进行D4多肽修饰的靶向荧光脂质体在脑内小胶质细胞的作用研究，操作如下：
一、 以EPC/HSPC,Chol和DSPE-PEG2000，FITC-DHPE/Dii为材料，制备不同处方的空白荧光脂质体和D4多肽修饰的靶向荧光脂质体，利用差速震荡法在大鼠乳鼠中分离得到原代小胶质细胞，与荧光脂质体共同孵育后，用流式细胞仪和共聚焦显微镜观察空白与靶向荧光脂质体与小胶质细胞的体外结合情况。
结果：HSPC脂质体在含有2％D4多肽时与小胶质细胞和星型胶质细胞都有较好的结合；荧光共聚焦显微镜观察显示，靶向脂质体的结合明显优于非靶向脂质体，且靶向脂质体与小胶质细胞在0.5 h时就有很好的结合，与星型胶质细胞在4h时有较好的结合，而与少突胶质细胞的结合不明显。
二、 D4脂质体与小胶质细胞在体内的结合，尾静脉注射3h后，利用磁珠分选方法分离出大脑中的小胶质细胞，流式细胞仪检测荧光脂质体与小胶质细胞在体内的结合强弱。
结果：D4多肽修饰的脂质体与小胶质细胞的结合与空白脂质体与小胶质细胞的结合有显著性差异。
三、 为进一步观察荧光脂质体在脑组织中的分布，用免疫组化的方法，尾静脉注射荧光脂质体后2 h,4 h和10 h取出完整脑组织，冰冻切片，CD68标记小胶质细胞，DAPI染细胞核后，共聚焦显微镜下观察。
结果：4 h时D4多肽脂质体开始靠近小胶质细胞，10 h时，D4多肽修饰的荧光脂质体与小胶质细胞完全结合，而非靶向脂质体与小胶质细胞没有结合。
最后，还可利用主动载药方法制备阿霉素脂质体，脑部原位注射种植黑色素瘤细胞7天后，尾静脉给药，每3天一次，连续两周，用PET技术比较非靶向与靶向组脑肿瘤大小。
结果：靶向组小鼠与非靶向组小鼠的肿瘤大小都比没给药组小，但是靶向组与非靶向组没有显著性差异。可能的原因是肿瘤组织中的血脑屏障被破坏，或者脂质体的毒性也作用于小胶质细胞而导致不能有效地免疫应答。
关键词定制:
D4多肽修饰的荧光脂质体
DSPE-PEG2000-D4
DSPE-PEG2000
DSPE-PEG2000-FITC
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