Worthington胶原蛋白酶的特点和用途

艾美捷Worthington胶原蛋白酶原料认证：

粗胶原酶制剂含有两种不同胶原酶的几种同工型，一种巯基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一种胰蛋白酶样酶和一种氨肽酶。这种胶原蛋白水解和蛋白水解活性的组合可有效分解细胞间基质，这是组织解离的重要部分。该复合物的一个成分是水解酶，它优先在序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 键处降解天然胶原蛋白中的螺旋区域，其中 Y 最常见的是中性氨基酸。这种切割产生对进一步肽酶消化敏感的产物。粗胶原酶被半胱氨酸、EDTA 或邻菲咯啉等金属螯合剂抑制，但 DFP 不抑制。它也被一种大的血浆糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。钙2+是酶活性所必需的。每种胶原酶的特定酶谱已与从中获得研究细胞的组织（或与放置细胞的用途）相关，并且作为相关性的结果，Worthington 已经建立了几种类型的粗胶原酶：类型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。

• 2 型含有较高相对水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。

• 3 型含有最低水平的二级蛋白酶。

• 4 型被设计成胰蛋白酶活性特别低，以限制对膜蛋白和受体的损害。

• 5 型 含有较高的胶原酶和酪蛋白酶值。

• 6 型 含有高胶原酶活性，酪蛋白酶与胶原酶的比例约为 2:1。设计为相对于 I 型 ( col  G)富含 II 型 ( col  H) 胶原酶。

• 7 型胶原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型胶原酶高四倍。

艾美捷Worthington无动物型 AFA、AFB 和 AFC、STZ1 和 STZ2胶原蛋白酶源自在完全不含动物成分的培养基中生长的培养物，设计用于必须防止引入潜在动物源性病原体的生物加工应用。二级蛋白酶的水平与 1 型和 2 型胶原酶相似。

•  CLSAFA 是最初的 AFA 等级，旨在含有类似于 1 型和 2 型胶原酶的胶原酶和二级蛋白酶。

•  CLSAFB 含有比 CLSAFA 更高的胶原酶和酪蛋白酶活性。

•  CLSAFC 具有特别低的胰蛋白酶活性，类似于 4 型胶原酶。

•  STZ1 和 STZ2，0.22μ 过滤的 STEMxyme ® AOF 胶原酶/中性蛋白酶 (Dispase®) 混合物，用于原代细胞和干细胞分离。

胶原蛋白酶测定是Mandl的改进，其中将胶原酶与天然胶原一起温育5小时，并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法测定胶原分解的程度。释放的氨基酸以每毫克胶原酶微摩尔亮氨酸表示。

艾美捷Worthington胶原蛋白酶用途：

粗胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。大多数研究人员要么使用粗制胶原酶制剂，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色谱纯化的胶原酶（代码：CLSPA）；后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合。为了获得最佳结果，必须针对要解离的组织调整蛋白水解活性的较精确混合。不同组织的类型和有效性之间的相关性很好，但并不完美，并且可能部分取决于使用参数和目标以及批次间的差异。