BCECF（CAS: 85138-49-4；pH荧光指示剂）

什么是BCECF？

BCECF 是一种对 pH 非常敏感 (pH-sensitive) 的荧光素，是应用最广泛的荧光 pH 传感器。 pKa 为 6.97，接近生理 pH 值。BCECF 应用于测量淋巴细胞中细胞质 pH值 的荧光指示剂。BCECF 允许测量生理 pH 值范围在 6.0-8.0 之间。激发波长: 490/440 nm; 发射强度: 535 nm。

BCECF理化性质

中文名：2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素（85138-49-4）;BCECF酸；BCECF PH指示剂

英文名：BCECF;BCECF pH Indicators；BCECF Acid pH indicator；PH Sensitive Dye；pH-sensitive Fluorescein Dye

CAS号：85138-49-4

SMILES：c1cc(c(cc1C(=O)O)c2c3cc(c(cc3oc-4cc(=O)c(cc24)CCC(=O)O)O)CCC(=O)O)C(=O)O

Inchi：InChI=1S/C27H20O11/c28-19-10-21-17(7-12(19)2-5-23(30)31)25(16-9-14(26(34)35)1-4-15(16)27(36)37)18-8-13(3-6-24(32)33)20(29)11-22(18)38-21/h1,4,7-11,28H,2-3,5-6H2,(H,30,31)(H,32,33)(H,34,35)(H,36,37)

InchiKey：DKROGDOAOXDINY-UHFFFAOYSA-N

分子式 ：C27H20O11

分子量 ：520.44

闪点 ：318.3±27.8 °C

沸点：936.2±65.0 °C at 760 mmHg

极化度：49.8±0.5 10-24cm3

密度 ：1.6700

溶解度：SolubilitySoluble in water (slightly), DMSO, DMF, and methanol.

性状：Solid，power

储藏条件：-20°C；BCECF储备液：在-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存1个月。

BCECF光谱 （ pH 5.5 and pH 9.0）

BCECF使用方法

1. 储存液的配制
加入高质量无水DMSO将其配制成1-20 mM的储存液。建议使用前进行配制，暂时不用的储存液务必按照每次使用量分装后于≤-20℃避光冻存。避免反复冻融！！！
2. 染色步骤
※ 细胞准备
按照96孔板每孔100 uL 4～8×104个细胞，384孔板每孔25 uL1～2×104个细胞对细胞进行铺板使其过夜生长。
备注：对于不同的细胞需参照文献对细胞密度进行优化调整。
※ BCECF 工作液的配制
根据具体使用量，取适量上述配制的储存液，用HHBS（Hanks and 20 mM Hepes buffer）缓冲液稀释成2-50 µM工作液。
※ 染色
分别加入等体积的BCECF,AM染液（96孔板，每孔加入100 µL; 384孔板每孔加入25 µL），于37℃细胞培养箱内孵育30-60 min。
注：a. 染色液中不能含有血清，因为血清中可能含有内源性酯酶活性，因此应避免；
      b. 染色液中不能含有氨基酸，因为存在的脂胺可能会断裂AM基团，阻止染料的加载。
※ 清洗
吸除染液，用HHBS清洗细胞2次。
※  加入适当量复合物后观察荧光强度变化。
使用合适荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光强度。可用490 nm、430 nm激发波长，530 nm发射波长对其进行比率测定。

BCECF的实验案例

(A) BCECF 的化学式。 (B) 用 BCECF 染色的皮肤组织的终生图像（数据由旧金山大学的 Theodora Mauro、Zeiss LSM 510 NLO 和 bh SPC-830 提供）。 寿命是pH的指标。 （C 和 D）BCECF 的荧光寿命随 pH 值而变化，并定义了细胞间脂质中人工角质层表面的较低 pH 值（改编自 Niesner 等人 [92]）。