【选择性必修3】3.2-1目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的原核真核非
PCR技术（聚合酶链式反应）可以用于获取和扩增目的原核真核非编码区内含子。具体步骤如下：
- DNA提取：从细胞中提取DNA样品，通常使用DNA纯化试剂盒来进行提取和纯化。
- 设计引物：根据目的DNA序列设计合适的引物。对于内含子扩增，需要设计一对引物，它们分别位于内含子两端的外显子上。引物需要与目标序列匹配并特异性强，并能在PCR反应条件下成功扩增目标片段。
- PCR反应：将DNA模板，引物，Taq聚合酶和其他反应物混合加热至适当温度以使双链DNA解离成单链，并在适当条件下进行PCR反应，使目标序列被扩增。PCR反应周期数和温度将根据所扩增序列的长度和特定的引物来进行优化。
- PCR产物检测：可以通过凝胶电泳等方法检测PCR扩增产物，确认是否扩增到了目标片段。检测后可进一步纯化PCR产物以获得更高的纯度。
PCR反应过程中，需要使用DNA模板、引物、聚合酶和其他反应物混合进行反应，扩增出目标片段。具体步骤如下：
- DNA模板制备：从提取到的DNA样品中制备所需的DNA模板。可以将提取的DNA溶解在TE缓冲液或水中，并使用电泳等方法检测DNA质量和浓度。
- 引物设计：根据目标序列的基因组信息，在内含子两端外显子序列上设计一对引物。引物应与目标序列特异性强，长度约18-25个核苷酸。建议使用引物设计软件和NCBI数据库进行验证。
- PCR反应条件设置：根据所设计的引物和目标序列的特性，确定PCR反应的条件：PCR扩增温度、时间、插入物浓度、聚合酶浓度等参数。通常情况下，PCR反应需要进行30-40个周期。
- 反应体系制备：根据PCR反应条件设置，将所需试剂按比例加入反应管或PCR板中。反应液中应该包括适当的缓冲液、退火温度的两个引物、聚合酶、dNTPs和DNA模板。注意避免污染和氧化，可以在PCR反应前进行DNase消化或UV灭菌。
- PCR扩增：将反应管或PCR板放入PCR仪中，按照所设定的反应条件进行PCR反应，其中包括单链DNA解离、引物结合、扩增和产物复性等步骤。PCR过程中，应严格遵守洁净实验条件，防止污染。
- PCR产物检测：可以通过凝胶电泳等方法对PCR扩增产物进行检测。通常情况下，需要将PCR产物用琼脂糖凝胶电泳进行分离，并在紫外线照射下观察PCR扩增产物带的大小、数量等特征。检测可能需要使用相应的DNA标记物，如分子量标记物、荧光标记物等。
