蛋白质印迹（简介、步骤）

什么是蛋白质印迹

蛋白质印迹是一种杂交技术，用于检测样品中的特定蛋白质。它也被称为免疫印迹，因为该技术使用抗体来标记感兴趣的蛋白质和检测抗体标记的蛋白质。

图1：蛋白质印迹

蛋白质印迹最初是由Towbin于1979年开发的，目前已被用作蛋白质分析的常规技术。

蛋白质印迹如何进行？

蛋白质印迹主要用于检测样品中的特定蛋白质。蛋白质印迹技术的步骤如下所述。

1. 蛋白质样品根据其大小通过SDS-PAGE进行分离。

2. 将蛋白质转移到膜上 – 将大小分馏的蛋白质转移到硝化纤维素或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜中。这种转移所涉及的技术是扩散转移。

3. 阻断非特异性位点 – 膜上未被占用的位点被阻断，以防止蛋白质的非特异性结合。脱脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）可用于此目的。

4. 一抗孵育 – 将封闭的膜与一抗溶液一起孵育。这些一抗与膜上的特定蛋白质结合。

5. 二抗孵育 – 膜与二抗一起孵育，二抗与一抗结合。二抗与报告蛋白偶联。这些报告蛋白可以是生物素、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

6. 通过显色进行蛋白质检测 – 偶联酶报告基因与其底物反应，生成有色碱性磷酸酶，将 BCIP 转化为蓝色产物，而辣根过氧化物酶转换鲁米诺，发光。

图2：蛋白质印迹 – 步骤

结论

蛋白质印迹是一种杂交技术，用于检测样品中是否存在特定蛋白质。它使用SDS-PAGE根据其大小和与一抗的结合来分离蛋白质，这些蛋白质可以在颜色发育过程中被二抗识别。