来源 TMR Publishing Group

作者 Traditional Medicine Research 编辑部

研究亮点

茅莓总皂苷（TSRP）通过抑制体内外的Bcl-2、Fas表达，增加体内外Bax表达来诱导Raji细胞凋亡。此外，TSRP对控制体外细胞凋亡的线粒体途径有一定的影响。

研究背景

茅莓（RP）属蔷薇科，现代药理实验表明，RP的水提取物具有止血、活血、化瘀的作用，已成功用于治疗冠心病、心绞痛等心血管疾病。根据之前的研究发现，TSRP在体内外均可显著诱导人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡。此外，还发现TSRP能明显抑制信号传导与转录激活因子3 (STAT3)的磷酸化，增加AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化。高浓度TSRP还可显著抑制蛋白激酶B (Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化。

淋巴瘤是常见的循环系统肿瘤。虽然分子靶向治疗和嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T)在治疗淋巴瘤方面取得了很大进展，但联合化疗仍是目前主要的治疗方法。但化疗药物毒性强，且易产生耐药性。有报道称TSRP对Hut-78人皮肤T细胞淋巴瘤有抗肿瘤活性，但目前针对TSRP对淋巴瘤的抑制作用的机制研究还甚少。与此同时，通过临床观察发现口服RP可以减少淋巴瘤患者的发热和盗汗。因此，我们探究了TSRP对淋巴瘤的影响，为确定该种抑制淋巴瘤细胞恶性增殖的有效成分提供了依据。

研究方法

淋巴瘤裸鼠模型的建立及分组

将Raji淋巴瘤细胞通过皮下移植到3周龄BALB裸鼠的左腋窝。剂量为0.2 mL /只，共20只小鼠（其中5只未形成肿瘤），培养2周。将形成肿瘤的裸鼠随机分为三组，每组5只：①对照组(生理盐水)；② TSRP低剂量组(20 mg / kg )；③ TSRP高剂量组(100 mg / kg )。

TSRP在体内外对淋巴瘤Raji的抑制作用的分析

分析比较不同浓度TSRP处理后移植瘤的体积、重量和抑制率。分别用TUNEL法和免疫组织化学法检测细胞凋亡和Bcl-2、Bax、Fas蛋白的表达。用MTT法检测TSRP对细胞增殖的影响。用DAPI染色和蛋白质印迹法检测细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3）、Bcl-2、Bax和Fas蛋白的表达。

结果

TSRP对淋巴瘤细胞的抑制作用

TSRP低剂量组和高剂量组肿瘤的重量明显低于对照组。高剂量和低剂量TSRP组对移植瘤小鼠的抑瘤率分别为90.84%和27.96%，与对照组有显著差异(P < 0.001，表1)，表明TSRP对淋巴瘤具有抑制作用，且高剂量TSRP的抑制作用更好。

TSRP治疗后移植瘤大小的变化

随着治疗的推进，与对照组相比，TSRP低剂量组和高剂量组的肿瘤大小均显示出显著差异。表明TSRP在体内能强烈抑制Raji细胞的生长(表2)。

肿瘤细胞凋亡的TUNEL分析

凋亡细胞在激光共聚焦显微镜(×200)下进行荧光分析。高剂量组的凋亡细胞比对照组多且呈中心分布。利用徕卡共聚焦软件，定量分析了三组淋巴瘤凋亡细胞的荧光强度(P < 0.001，图1)。结果表明TSRP在体内通过促进细胞凋亡抑制淋巴瘤细胞的生长。

免疫组织化学分析确定移植肿瘤的Bcl-2、Bax和Fas的表达

结果表明，与对照组相比，经TSRP处理的肿瘤Raji细胞的Bcl-2、Fas表达均明显降低，而Bax的表达明显增加。这表明TSRP通过降低Bcl-2、Fas的表达，增加Bax的表达诱导Raji细胞凋亡(图2)。

TSRP对Raji细胞增殖的抑制作用的MTT分析

MTT法显示100 - 400 μg / mL TSRP对Raji细胞的抑制作用呈剂量依赖性(P < 0.001，表3)。这表明TSRP在体外对淋巴瘤细胞生长具有相当强的抑制作用。

DAPI染色观察TSRP诱导Raji细胞凋亡

对照组细胞核呈规则圆形，染色均匀。随着TSRP浓度的增加，细胞核破裂，形成被细胞膜包裹的不同大小的圆形体(称为凋亡体)，能明显观察到细胞凋亡(图3)。表明TSRP能在体外诱导Raji细胞凋亡。

蛋白印迹分析评估Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-9和Caspase-3的表达

TSRP的加入显著抑制了Raji细胞中Bcl-2、Fas的活性，增加了Bax的活性并呈现剂量依赖性。这表明TSRP通过抑制Bcl-2、Fas表达，增加Bax表达诱导细胞凋亡。同时研究发现Caspase-9和Caspase-3的表达也随着TSRP浓度的增加而增加(图4，表4)，表明TSRP在体外通过线粒体途径诱导细胞凋亡。但仍需进一步的体内实验来证实这些结果。

结论

TSRP通过在体内和体外抑制Bcl-2、Fas表达，增加Bax表达诱导Raji细胞凋亡。此外，TSRP对控制体外细胞凋亡的线粒体途径有一定的影响。

扫码二维码获取全文

引用格式

Xu XF, Cheng RB, Zhang XJ, Gao RL. Total saponins in Rubus parvifolius L.induce lymphoma cells apoptosis through upregulated Bax/Fas and downregulated Bcl-2 in vivo and in vitro. Tradit Med Res. 2019;4(2):99–108. doi:10.53388/TMR20190304108

订阅 Traditional Medicine Research 期刊

只需将电子邮箱发送至 "传统医学研究"公众号后台

我们会定期将电子期刊发送到您的邮箱

传统医学研究 Traditional Medicine Research（ISSN 2413-3973）【2021免版面费】 已被Emerging Sources Citation Index (ESCI), 2020年中科院期刊分区, Embase, DOAJ, ProQuest, J-Gate, EuroPub, WHO-COVID-19 Database 等数据库收录。特别欢迎具有明确历史记载、民族特色和地域特色的传统医学研究和相关社会科学研究。官网：https://www.tmrjournals.com/tmr投稿地址：https://submission.tmrjournals.com