挥发酚用4-氨基安替比林分光光度法测定的方法步骤
挥发酚类通常指沸点在230 ℃以下的酚类，属一元酚，是高毒物质。生活饮用水和Ⅰ、Ⅱ类地表水水质限值均为0.002 mg/L，废(污)水中最高允许排放浓度为0.5 mg/L(一、二级标准)。测定挥发酚类的方法有4-氨基安替比林分光光度法、溴化滴定法、气相色谱法等。本实验用4-氨基安替比林分光光度法测定废水中的挥发酚。
4-氨基安替比林分光光度法
(一)原理
酚类化合物在pH 10±0.2的介质中，在铁氰化钾的存在下，与4-氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚安替比林染料，在510 nm波长处有最大吸收，用比色法定量。
(二)仪器
(1)500 mL全玻璃蒸馏器。
(2)50 mL具塞比色管。
(3)分光光度计。
(2)当水样中含游离氯等氧化剂、硫化物、油类、芳香胺类及甲醛、亚硫酸钠等还原剂时，应在蒸馏前先做适当的预处理。处理方法参阅《水和废水监测分析方法》(第四版)第四篇第二章。
(七)结果处理
(1)绘制吸光度-苯酚含量(mg)标准曲线。
(2)计算水样中挥发酚类含量(以苯酚计，mg/L)。
(3)根据实际情况，分析影响测定结果准确度的因素。
(三)试剂
(1)无酚水：于1 L水中加入0.2 g经200 ℃活化0.5 h的活性炭粉末，充分摇匀后，放置过夜。用双层中速滤纸过滤，滤出液贮于硬质玻璃瓶中备用。或加氢氧化钠使水呈强碱性，并滴加高锰酸钾溶液至紫红色，移入蒸馏瓶中加热蒸馏，收集馏出液备用。
(2)硫酸铜溶液：称取50 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶于水，稀释至500 mL。
(3)磷酸溶液：量取10 mL 85%的磷酸用水稀释至100 mL。
(4)甲基橙指示剂溶液：称取0.05 g甲基橙溶于100 mL水中。
(5)苯酚标准储备液：称取1.00 g无色苯酚溶于水，移入1000 mL容量瓶中，稀释至标线，置于冰箱内备用。该溶液按下述方法标定：
吸取10.00 mL苯酚标准储备液于250 mL碘量瓶中，加100 mL水和10.00 mL 0.1000 mol/L溴酸钾-溴化钾溶液，立即加入5 mL浓盐酸，盖好瓶塞，轻轻摇匀，于暗处放置10 min。加入1 g碘化钾，密塞，轻轻摇匀，于暗处放置5 min后，用0.125 mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加1 mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去，记录用量。以水代替苯酚储备液做空白试验，记录硫代硫酸钠标准溶液用量。苯酚储备液浓度按下式计算：
式中：
V1—空白试验消耗硫代硫酸钠标准溶液量，mL;
V2—滴定苯酚标准储备液时消耗硫代硫酸钠标准溶液量，mL;
V—苯酚标准储备液体积，mL;
c—硫代硫酸钠标准溶液浓度，mol/L;
15.68—苯酚摩尔(1/6C6H5OH)质量，g/mol。
(6)苯酚标准中间液：取适量苯酚储备液，用水稀释至每mL含0.010 mg苯酚。使用时当天配制。
(7)溴酸钾-溴化钾标准参考溶液(c1/6KBrO3=0.1 mol/L)：称取2.784 g溴酸钾(KBrO3)溶于水，加入10 g溴化钾(KBr)，使其溶解，移入1000 mL容量瓶中，稀释至标线。
(8)碘酸钾标准溶液(c1/6KIO3=0.250 mol/L)：称取预先经180 ℃烘干的碘酸钾0.8917 g溶于水，移入1000 mL容量瓶中，稀释至标线。
(9)硫代硫酸钠标准溶液：称取6.2 g硫代硫酸钠(Na2S3O3·5H2O)溶于煮沸放冷的水中，加入0.2 g碳酸钠，稀释至1000 mL，临用前，用下述方法标定：
吸取20.00 mL碘酸钾溶液于250 mL碘量瓶中，加水稀释至100 mL，加1 g碘化钾，再加5 mL(1+5)硫酸，加塞，轻轻摇匀。置暗处放置5 min，用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，加1 mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚褪去为止，记录硫代硫酸钠溶液用量。按下式计算硫代硫酸钠溶液浓度(mol/L)：
式中：
V3—硫代硫酸钠标准溶液消耗量，mL;
V4—移取碘酸钾标准溶液量，mL;
0.0250—碘酸钾标准溶液浓度，mol/L。
(10)淀粉溶液：称取1 g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，加沸水至100 mL，冷后，置冰箱内保存。
(11)缓冲溶液(pH约为10)：称取2 g氯化铵(NH4Cl)溶于100 mL氨水中，加塞，置于冰箱内保存。
(12)2%(m/V)4-氨基安替比林溶液：称取4-氨基安替比林(C11H13N3O)2 g溶于水，稀释至100 mL，置于冰箱内保存，可使用一周。(固体试剂易潮解、氧化，宜保存在干燥器中)。
(13)8%(m/V)铁氰化钾溶液：称取8 g铁氰化钾{K3[Fe(CN)6]}溶于水，稀释至100 mL，置于冰箱内保存。可使用一周。
(四)测定步骤
(1)水样预处理：
①量取250 mL水样置于蒸馏瓶中，加数粒小玻璃珠以防暴沸，再加两滴甲基橙指示液，用磷酸溶液调节至pH=4(溶液呈橙红色)，加5.0 mL硫酸铜溶液。如加入硫酸铜溶液后产生较多黑色硫化铜沉淀，则应摇匀后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸铜溶液，至不再产生沉淀为止。
②连接冷凝器加热蒸馏，至蒸馏出约225 mL时，停止加热，放冷。向蒸馏瓶中加入25 mL水，继续蒸馏至馏出液为250 mL为止。蒸馏过程中，如发现甲基橙的红色褪去，应在蒸馏结束后，再加1滴甲基橙指示液。如发现蒸馏后残液不呈酸性，则应重新取样，增加磷酸加入量，进行蒸馏。
(2)标准曲线绘制：于一组8支50 mL比色管中，分别加入吸取0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.0、12.50 mL苯酚标准中间液，加水至50 mL标线。加0.5 mL缓冲溶液，混匀，此时pH值为10.0±0.2，加4-氨基安替比林溶液1.0 mL，混匀。再加1.0 mL铁氰化钾溶液，充分混匀，放置10 min后立即于510 nm波长处，用20 mm比色皿，以水为参比，测量吸光度。经空白校正后，绘制吸光度对苯酚含量(mg)的标准曲线。
(3)水样的测定：分取适量馏出液于50 mL比色管中，稀释至标线。用与绘制标准曲线相同步骤显色和测定吸光度，计算减去空白试验后的吸光度。
(4)空白试验：以水代替水样，经蒸馏后，按与水样相同的步骤测定，以其结果作为水样测定的空白校正值。
注意事项
（1）如水样含挥发酚较高，移取适量水样并加水至250 mL进行蒸馏，则在计算时应乘以稀释倍数。如水样中挥发酚类浓度低于0.5 mg/L时，采用4－氨基安替比林萃取分光光度法。
（2）当水样中含游离氯等氧化剂、硫化物、油类、芳香胺类及甲醛、亚硫酸钠等还原剂时，应在蒸馏前先做适当的预处理。处理方法参阅《水和废水监测分析方法》（第四版）第四篇第二章。
