百萤课堂之ReadiLink生物素 缺口平移 dsDNA标记试剂盒实验方案

一、百萤ReadiLink生物素 缺口平移 dsDNA标记试剂盒概述 ReadiLink 生物素 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法，可以使用明亮且光稳定的 生物素染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链，生物素染料与之结合。此外，该试剂盒允许用户通过调整 生物素-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容，包括人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 生物素标记 DNA 可用于多种分子生物学技术，例如荧光原位杂交 (FISH)。   二、百萤ReadiLink生物素 缺口平移 dsDNA标记试剂盒实验方案  

简要概述

1. 准备 DNA 样本

2. 向试管中加入试剂

3. 短暂混合并离心

4. 在 15°C 下孵育 60 分钟

5. 将反应置于冰上，然后加入停止溶液并在 65°C 下加热

6. 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存

7. 纯化标记的 DNA

 注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。  实验步骤 表1.各反应每管试剂组成

可以优化生物素-dUTP（组分 A）：dTTP（组分 E）的比例以获得佳标记条件。 可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记，但可能会缩短终产品的尺寸。 1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序添加试剂。 2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。 3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。 4.孵育后，将反应置于冰上。 5.要终止反应，请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。 6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。 7.纯化标记的 DNA。