BHQ-3 NHS，871240-94-7暗猝灭剂具有620-730 nm的强吸收范围

英文名称：BHQ-3 NHS

CAS：871240-94-7

外观：深紫色粉末

分子式：C37H38N7O4+

分子量：644.76

储存条件：-20°C，避光避湿

结构式：

产品简介：黑暗猝灭剂®-3染料寡核苷酸修饰。BHQ-3可以位于5或3末端或寡核苷酸的内部。BHQ®-3标记的寡核苷酸用于许多应用，包括用于实时PCR的双标记荧光探针。该暗猝灭剂具有620-730 nm的强吸收范围，可对在该范围内发出荧光的荧光团（如Quasar?670和Quasar 705染料）进行极好的猝灭。

NHS修饰是合成后与一个伯氨基的共轭，因此是一个附加的需要用氨基修饰。C6或C12氨基可置于5&＃39;或对于3&＃39;端，使用C3或C7氨基，对于内部位置，使用氨基修饰的碱，例如氨基dT C6。基于NHS的产率修饰是使用伯氨基进行的合成后共轭。与可作为酰胺的直接自动化偶联改性相比，产率较低。近似各种规模的产量如下所示。

50 nmol规模合成的终产量约为2 nmol。

200 nmol规模合成的~5 nmol终产量。

1μmol规模合成的~16 nmol终收率

黑洞猝灭剂-1（BHQ-1）被归类为暗猝灭剂（一种非荧光发色团），被使用作为各种荧光共振能量转移（FRET）DNA检测探针中的3&＃39;-猝灭部分。这样的探针主要用于核酸分析，但也可用于核酸结构研究（1）。例子包括TaqMan探针（2）、蝎子引物（3）和分子信标（4）。BHQ-1的吸光度为534 nm，有效吸光度范围为480-580 nm。这是用于与荧光染料配对的猝灭剂，荧光染料在可见光范围（519-556 nm）的黄绿色到黄色部分发射。这个染料的发射光谱与BHQ-1的吸收光谱充分重叠，从而使后者能够淬灭染料前者荧光。

在FRET探针中使用暗猝灭器的优点是低背景荧光（因此更好）信噪比，（b）更高的动态范围，（c）适用于多重分析（由于暗猝灭器没有二次荧光），以及（d）使用暗猝灭剂易于合成FRET探针（因为暗猝灭剂在低聚物脱保护步骤中抗降解）（5）。

作为核酸杂交探针检测系统使用的各种荧光染料和猝灭剂分子的开发允许开发几种不同的实时PCR分析系统，这些系统利用染料猝灭剂杂交探针，仅当它们与目标结合时才产生荧光信号。然而，为了正确设计针对特定目标的分析，重要的是根据分析中使用的杂交探针类型、待检测的目标数量以及可用于执行分析的设备类型，仔细选择杂交探针的染料和猝灭剂。

1） 选择能被激发源和你计划在实验中使用的分光光度热循环仪的光学元件适当激发和检测的荧光染料。基于激光的激发源通常在窄波长范围内（例如，氩离子激光器为500-540 nm）提供激发，而白光源（例如，卤钨灯）和发光二极管与激发和发射滤光片结合可在整个可见范围（400-700 nm）内激发荧光团。

2） 对于用一个杂交探针检测一个目标，建议对染料使用FAM、HEX或TET，因为它们可以在所有分光光度热循环仪上检测到，并且所有三种探针都可以使用磷酰胺（这使得探针的合成简单且具有成本效益）。

3） 对于复合分析，至少需要两种不同的杂交探针，应选择吸收和发射波长分离良好的染料。

4） 对于FRET杂交探针，应选择光谱高度重叠的荧光染料猝灭剂对。请参阅淬火剂选择表以选择适当的淬火剂。

5） 对于基于接触猝灭的杂交探针（例如，分子信标），任何非荧光猝灭剂都应工作良好。

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