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【质谱学堂】2023年交流群问题集(8)

2023-09-04 22:07 作者:质谱学堂  | 我要投稿



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本期的质谱学堂交流群问题集由瑾微共同进行整理的,欢迎感兴趣的朋友多多转发支持啦!当然我们也非常期待更多的液质小伙伴加入质谱学堂,一起做最专业的分享!


01 关机流程


Q(Urotropin):Hallo,我想请问一下有没有知道请安捷伦G6125B SQ的关机流程吗?请问是在操作面板上vent之后等温度还有真空下降之后就可以直接关电源了吗?

A(wt):进度条走完就好了。

Q(Urotropin):那请问油泵会自动关闭吗,还是需要手动关闭,另外油泵关掉之后还需要再放真空吗,谢谢。

A(Grapefruit cat):应该是先卸真空后关油泵。液质油泵加泵油需要卸真空吗?

A(见茧):加油不得停机械泵吗?停泵真空就没了吧!

A(wt):你要是前级泵没插在墙上的话,放空的过程中前级泵自己就关掉了,不需要手动再去关了,要是你们前级泵直接插墙上的插座的话,放空时候那个进度条走不到底的,等涡轮泵转速下来之后了,需要手动把前级泵关掉。

Q(Urotropin):那么重启MS的话就是反过来对吧 先开油泵(如果在墙上)-打开仪器等参数稳定-然后做autotune?

A(wt):嗯嗯,抽起来稍微等等时间再调谐。

Q(Urotropin):非常感谢。

         

AB Sciex 要求真空度

瑾微:质谱开关机是很关键的操作步骤,如果操作失误可能会对仪器造成损伤。我们这篇文章对AB Sciex、安捷伦以及waters的质谱仪的开关机流程都有介绍,大家可以对照操作哦!您的假期余额已不足,赶快来开启您的宝贝吧:液质(LCMS)开关机流程

         

02 质谱方法开发


Q(beam):请问用sciex的QQQ定量,Q1离子是确定的吗,做的和文献中不一样?Q1和Q3和文献中的都不一样的,这也可行吗?

A(德令哈):根据自己打出来的就行,不同的仪器,小数点后面可能有些微差别。

Q(beam):文章中Q1是151, 我的是Q1是115,这行吗?

A(德令哈):这肯定不行,最多是小数点,差几十肯定不是一个离子了。

A(ZQK):脱了两个水吧,DP太大,TEM太高。

Q(wt):我的化合物分子量124,单杆做着没问题,三杆Scan就找不到124这个离子了,只有零零碎碎一些,是啥情况?


正离子模式下常见的加合离子

阴离子模式下常见的加合离子

瑾微:我考虑可能是CE较高,将m/z 124的母离子打碎了,可以将碰撞能从低到高调整,母离子响应会从高到低,碎片离子数量和响应则会从少逐渐增多。


我爱吃虾: 对开发感兴趣的小伙伴,可以关注【方法开发系列文章;

液质分析方法开发【基础篇】——质谱条件优化

液质分析方法开发【基础篇】——液相条件优化(上)

液质分析方法开发【基础篇】——液相条件优化(下)

液质分析方法开发【基础篇】——前处理条件优化

液质分析方法开发【基础篇】——基质效应

液质分析方法开发【基础篇】——残留与污染

玩转质谱|4|:液质(LCMS)中常见的子离子

玩转质谱|3|:液质(LCMS)中化合物常用的几种扫描模式

          

03 16s rDNA测序


Q(习简):请问有人做过16s rDNA测序吗?想请问测序后是可以根据序列知道具体的菌株吗?

A(Shape):16s一般是鉴定到属的水平。菌株是分不开的。

Q(习简):在测序前,能不能先分离菌株,比如放线菌或者拟杆菌什么的,然后只鉴定感兴趣的菌株啊?

A(Shape):主要是在后续的分析中,会把序列相似性在97%以上的片段作为一个物种来分析。序列相似性太近的话,做16s就没有意义。

Q(习简):好的,那16s和系统发育树有啥关系啊、

A(Shape):16s主要就是看一堆细菌各自的分布。系统发育树我不太懂。

Q(习简):好的好的谢谢你的解答。


瑾微:这个咱不太懂。。。就附张图吧~~,此外,还可以参考这篇文章

【微生物组学干货 | 16S rRNA基因测序技术介绍】

【16S rDNA 测序简介】

         

04表面活性剂的清除


Q(Lilly):大家给看看,什么问题,全扫图 waters。

A (HappyXing):表面活性剂污染。

Q(Lilly):对仪器会有很大影响吗,对其他化合物的定量有没有影响呢?

A (HappyXing):如果是内标法,理论上对定量结果影响较小;外标法,就不好说了,具体情况具体分析。既然有污染,对结果大概率是有影响的,就看你对数据变异的接受程度了。

Q(Lilly):这种污染,可以冲干净吗?咋冲?

A (HappyXing):先确认污染是液相还是质谱:断开液相管路,不进入质谱,看一下质谱那边干扰物在不在,如果不在,基本就是液相污染。不接质谱,去掉柱子,冲洗管路,确保管路已经冲洗干净,接质谱测试。确认无污染后,断开质谱,再冲洗柱子,然后再接质谱测试。


瑾微:前处理过程中最好消除表面活性剂,比如用固相萃取的方法,还有推荐洗柱子的时候可以加点异丙醇进去。还是要逐个排查吧,先判断质谱,如果质谱污染,最好清洗锥孔和四极杆,如果柱子污染,就好好冲柱子吧。。。

表面活性剂 简介表面活性剂具有两性分子结构:一端是亲水基团,简称亲水基,也称为疏油基或憎油基,能够使表面活性剂以单体的形式溶在水中。
亲水基团经常为极性基团,可为羧基(-COOH)、磺酸基(-SO3H)、氨基(-NH2)或胺基及其盐,羟基(-OH)、酰胺基、醚键(-O-)等也可作为极性亲水基团;
另一端是疏水基团,简称亲油基,也称为疏水基或憎水基。疏水基团通常为非极性烃链,如疏水的烷基链R-(烷基)、Ar-(芳基)等。
表面活性剂分为离子型表面活性剂(包括阳离子表面活性剂与阴离子表面活性剂)、非离子型表面活性剂、两性表面活性剂、复配表面活性剂、其他表面活性剂等。


表面活性剂溶液中,表面活性剂的浓度达到一定值后,表面活性剂分子会形成各种有序的组合体称之为胶束。胶束化作用或胶束的形成是表面活性剂溶液十分重要的基本性质,一些重要的界面现象都与胶束的形成有关。
使表面活性剂在溶液中形成胶束的浓度被称之为临界胶束浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)。胶束并不是固定不变的球形,它为极度不规则、动态变化的形状。在某些条件下,表面活性剂还会出现反胶束的状态。



影响临界胶束浓度 主要因素

表面活性剂的结构   

添加剂的加入与类型

温度的影响              


表面活性剂与蛋白质 相互作用蛋白质包含非极性、极性和带电基团,许多两亲分子均可以与蛋白质发生各种作用。表面活性剂在不同条件下可形成具有不同结构的分子有序组合体,如胶束、反胶束等,其分别与蛋白质相互作用也不同。
蛋白质-表面活性剂(Protein-Surfactant,P-S)之间主要存在着静电作用和疏水作用,离子型表面活性剂与蛋白质作用主要是极性基的静电作用和疏水碳氢链的疏水作用,分别结合到蛋白质的极性和疏水部分,形成P-S的复合物。
而非离子型表面活性剂主要通过疏水力与蛋白质发生作用,其疏水链与蛋白质的疏水基团之间的相互作用对表面活性剂和蛋白质的结构和功能都能产生一定的影响。因此,表面活性剂的类型、浓度和体系环境决定了表面活性剂是使蛋白质稳定还是失稳,聚集还是分散。


表面活性剂 HLB值表面活性剂要呈现特有的界面活性,必须使疏水基和亲水基之间有一定的平衡。HLB(Hydrophile-Lipophile Balance)是表面活性剂的亲水-亲油平衡值,是衡量表面活性剂的亲水疏水性能的指标。
HLB值是一个相对值(0~40之间),如石蜡HLB值=0(无亲水基),聚氧乙烯为20,亲水性较强的SDS其HLB值为40。HLB值可作为选用表面活性剂的参考依据。HLB值越大,说明该表面活性剂的亲水性越好;HLB值越小,则说明该表面活性剂的亲水性越差。

  

05气相色谱柱的选择


Q(felicita):问一下各位老师,就是DB-5MS的安捷伦气相色谱柱可以用来走短链脂肪酸吗?还是对于极性大的物质一定得用极性的气相柱?(如果得用极性柱的话就得买了)。

A(玉汝于陈):不一定会用到。如果分离度好的话,就用吧,非极性柱以沸点分离,如果能跟杂质分开,就不需要换极性柱,关注一下样品的pH,如果酸性太大就得需要硅烷化,减弱酸性,不然对柱子有损伤。

Q(felicita):老师,那气质有类似于液质的两通吗?就是不接柱子测一下质谱条件。之前没做过气质。

A(玉汝于陈):气质的灯丝能量是固定的,只有传输线温度和推斥极能量可能存在修改优化,所以筛选条件时需要更改的参数并不多,或者说气质的质谱那边不需要优化方法。

瑾微:气相色谱柱的极性可以根据柱种类不同,分为烃类和硅氧烷类(非极性固定液),聚乙二醇类(极性固定液),而非极性柱的分离顺序主要根据试液的沸点,而极性柱子分离顺序除了沸点之外还和物质的极性有关,此外,极性柱子的使用温度比非极性柱子的使用温度更低,这种特性使得非极性柱子适合沸点高的物质分析。

【做了多年气相,你真的了解你的色谱柱吗?】【气相色谱柱极性分类】


END


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