艾美捷 优化的Cas9核酸酶功能和应用介绍

Cas9核酸酶（CRISPR相关蛋白9）是一种RNA引导的核酸内切酶，用于通过产生序列特异性双链断裂（DSB）进行基因组编辑。DNA中DSB的存在导致细胞修复过程的激活，其中DNA恢复通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向重组（HDR）发生，从而改变基因组。基因敲低、缺失或插入说明了CRISPR/Cas9系统的主要成就。

艾美捷OZ Biosciences 优化的Cas9核酸酶化脓性链球菌设计用于活细胞或生物体的基因组编辑以及体外消化。

使用 Cas9/RNP 递送提高基因组编辑效率 成功的 CRISPR/Cas9 基因组编辑可以通过多种方法（质粒、mRNA、核酸酶、病毒递送）进行。

为什么选择Cas9蛋白而不是Cas9 DNA或mRNA？

Cas 9重组蛋白比核酸递送速度更快，一旦进入细胞内就完全活跃，没有潜伏期（与核酸所需的转录和翻译机器相反）。

这些特性使核酸酶蛋白递送特别适用于精密基因组工程。

图1：用sgRNA编程的Cas9核酸酶。结合后，短向导RNA（sgRNA）特异性靶向短DNA序列标签（PAM）。Cas9核酸酶在PAM序列上游切割DNA三个核苷酸。

高效的核酸递送是基因组编辑实验的关键步骤。 为了获得优化的Cas9核酸酶递送，建议亲交付 CRISPR转染试剂。

规格：

CAS9050： 50 μg Cas9 核酸酶在 50 μL 中

CAS9100： 100 μg Cas9 核酸酶在 100 μL 中

CAS9500： 500 μg （5x100 μg） Cas9 核酸酶，500μL （5x100 μL）

提供的试剂：Cas9反应缓冲液（10X）

推荐用于 CRISPR Cas9 基因组编辑实验。

优化的Cas9核酸酶化脓性链球菌设计用于活细胞或生物体的基因组编辑以及体外消化。

使用Pro-DeliverIN CRISPR在细胞中进行基因组编辑

Cas9核酸酶可以直接递送到培养物或生物体中的活细胞中，使用ProDeliverIN CRISPR（# PIC60100 或 #PIC60500）。以下方案是在24孔板中进行基因组编辑的示例：

制备 1 μg Cas9 核酸酶和 250 ng sgRNA 的混合物上下移液轻轻混合

在室温（推荐 10°C）下孵育 25 分钟以形成 Cas9/RNP 复合物直接加入 2 μL ProDeliverIN CRISPR

在室温（推荐 20°C）下孵育 25 分钟以形成复合物用完整的培养基补充 50 μL

将复合物滴加到细胞上，并在标准培养条件下孵育。