癌细胞代谢途径中的关键蛋白VDAC1与表观遗传的联系

2021-11-22 10:39 作者:分子科普小feng子 0人读过 | 我要投稿

活体转染系列软文第二弹来啦~

上一期我们介绍了活体转染技术并通过文献介绍了体内转染试剂的具体应用，也收到了很多读者的咨询，那么本期小编继续通过通过文献来看一下体内转染试剂在其他方面的应用。

本期给大家带来的这篇文献于2020年发表在Cancer上，主要内容是线粒体蛋白VDAC1的消耗对于肿瘤细胞的影响是通过代谢-表观遗传学轴介导的。

在之前的研究中就发现无论是体外还是体内将人的VDAC1沉默（si-hVDAC1），可以抑制各种类型实体瘤的生长。本文主要为了研究si-VDAC1治疗胶质母细胞瘤对表观遗传相关基因表达的影响。

首先选取无胸腺 8 周龄雄性裸鼠，皮下接种U-87MG 胶质母细胞瘤细胞到无胸腺 8 周龄雄性裸鼠的后腿侧面，诱导肿瘤发生。当肿瘤体积达到约60–100 mm3时，随机将小鼠分为肿瘤体积相当的两组。siRNA 和体内转染试剂（in vivo-jetPEI®，Polyplus）分别加入 5% 葡萄糖溶液中，并混合在一起。在室温下孵育 15 分钟后，将siRNA/in vivo-jetPEI® 复合物注射到小鼠体内。每组小鼠每三天进行siRNA（si-hVDAC1）或阴性对照（si-NT）的瘤内注射，至终浓度达到75nM。在实验结束时，人道处决小鼠，切除肿瘤并测量计算的平均肿瘤体积。测量结果表明注射siRNA的动物模型中获得的肿瘤的体积与阴性对照相比显著下降（图1A）。

此外qRT-PCR（图1B）与WB（图 1C、D）的检测VDAC1的水平，结果均表明si-hVDAC1处理的肿瘤中VDAC1的水平较阴性对照相比显著下调。

接着，为了分析si-VDAC1处理的肿瘤对表观遗传相关基因表达的影响，IHC（图 1E、F）和 qPCR（图 1G）检测阴性对照和 siRNA处理的肿瘤中代谢相关酶的表达水平。结果表明，所有测试蛋白质的表达水平在 si-hVDAC1处理的肿瘤中均下调，这与糖酵解和氧化磷酸化 (OXPHOS) 的改变一致。