PE标记鸡卵白蛋白，关于盐析法分离鸡卵白蛋白的工作原理以及过程

PE标记鸡卵白蛋白，关于盐析法分离鸡卵白蛋白的工作原理以及过程

今天小编整理并分享关于盐析法分离鸡卵白蛋白的工作原理以及过程：

盐析法，也称为逆向盐析或盐提取，是一种将蛋白质从溶液中分离出来的方法，通常用于将蛋白质从其他杂质分离出来，或者将蛋白质从高浓度溶液中稀释以便进一步处理的目的。

盐析法的工作原理是基于蛋白质的溶解性与盐浓度之间的关系。当在蛋白质溶液中添加足够的盐时，盐会与水分子竞争与蛋白质结合，从而降低蛋白质的水合层，导致蛋白质发生沉淀。然后，可以通过离心等方法将沉淀的蛋白质分离出来。

分离过程：

鸡蛋清原液的制备：

取新鲜鸡蛋,用双层灭菌纱布过滤得到水样成分,充分搅拌30 min(搅拌剧烈程度以不起泡沫为准)。为了降低鸡蛋清黏度以利于后续试验,取5 mL鸡蛋清用pH值9.0的Tris - HCl缓冲液(50 mL 0. 1 mol/LTris - base溶液与5.7 mL0. 1 molLHCI溶液混匀后,冷却到室温,加水定容到100 mL)进行5倍稀释,4℃下静置至少6 h。

鸡蛋清卵白蛋白盐析法分离：

将静置蛋清4 ℃、10 000 r/ min离心10 min,取上清液,缓慢多次加人烘干研磨成粉末的硫酸铵,磁力搅拌,使加入粉末溶解,并参考硫酸铵溶液饱和度计算表,使其饱和度分别达到 30% 、40% ,50% 、60% 、70%和80%。4℃静置过夜,于4 ℃,12 000 r/min离心10 min,不同饱和度离心所得沉淀均用pH值9.0的Tris - HCl缓冲液溶解,并在4℃.0.05 molL的 Tris -HCl缓冲液中进行透析。其间更换透析液2~4次,透析过夜。

以鸡蛋清为原料,使用 Tris - HCl 缓冲液进行稀释,降低鸡蛋清黏度,增加可溶性蛋白质的溶出和提取率,以利于后续试验。采用60%硫酸铵进行盐析的方法获得卵白蛋白的粗提物,回收率达到18.02% , SDS -PAGE显示卵白蛋白为主要条带,可有效分离鸡蛋中卵白蛋白,操作过程简单、快捷、成本低。综合考虑卵白蛋白纯度和提取率,可采用60%饱和度的硫酸铵盐析分离卵白蛋白。

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