迪赢生物提供化学合成5’-rApp修饰服务

什么是5’-rApp？

5’-rApp是指含有5’5’‑腺苷焦磷酸基帽的核酸，具有高能焦磷酸键，是一种活化形式的核酸分子。5‘-腺苷酰化修饰的寡核苷酸可以在不依赖ATP的情况下连接到不同序列的3’OH端，常用做3‘端为羟基的miRNA或单链DNA文库构建时的3’接头，减少分子间的自连。

迪赢生物提供5’腺苷酰化修饰

目前rAppDNA合成方式有两种：酶法合成和化学合成。其中酶法合成步骤复杂，需要在酶的作用下将ATP分解成AMP和PPi，然后将AMP转移到寡核酸5‘磷酸基团上，生成腺苷酰化产物。而化学合成，通过化学反应将rApp修饰连接到寡核苷酸5‘端，无需酶和ATP的参与。具有纯度高、成本低等优势。

迪赢生物基于专业的核酸化学科学家团队的研发和成熟稳定的合成纯化生产平台，现提供5‘腺苷酰化修饰，可化学合成5’腺苷酰化Oligo，用于下游miRNA建库等相关场景。

高纯度 高质量

迪赢生物自主合成的rApp腺苷酰化核酸，经过质谱检测和HPLC纯化，合成产物具有纯度高、准确率高的特点。

Mass质谱

HPLC高效液相

rApp在miRNA文库构建中的应用

体内miRNA较短（21-23nt），具有5'-磷酸和3'-OH末端。因此使用T4 RNA连接酶和ATP将接头连接到miRNA末端会发生miRNA自连接。5'-App修饰的接头可以很好的解决这个问题，通过使用RNA连接酶在不存在ATP的情况下将5'-App修饰的接头连接到miRNA的3'-OH端，而不能将一个RNA的5'端与另一个RNA的3'端连接，从而避免了 RNA分子间的自连，减少了文库中RNA嵌合体的存在。

rApp的其他应用

核酶/脱氧核酸酶体外选择的活化核酸底物

在RNA结构功能研究中通常需要结合位点特异性修饰。然而，由于这种修饰目前不可能通过体外转录方法实现，因此必须将修饰的化学合成RNA寡核苷酸和RNA转录物的各种组合连接在一起，以产生所需的长的修饰RNA分子。含有所需位点特异性修饰的5'-App寡核苷酸可作为开发核糖/脱氧核糖酶的体外选择和随后构建用于结构功能研究的特定长RNA的活化底物。

活化5‘端富含嘧啶的RNA

在5'端富含嘧啶的RNA通常很难甚至不可能用噬菌体聚合酶在体外转录。因此，获得5'-磷酸化的富含嘧啶的RNA，从而适合于连接，是一项重大挑战。这种RNA分子的5'-腺苷酸化可能是激活它们进行连接的可行策略。

5’标记

连接到寡聚物上的腺苷酸基团包含核糖2'，3'-二醇部分，可使用高碘酸钠氧化为醛。因此，5’-App核酸在这种氧化后，可以通过醛的还原胺化在5’端用荧光染料或其他生物物理探针标记。这种标记策略可用于在不可能或不希望使用固相合成插入特定的5’端修饰的情况。

【参考文献】

[1] Chiuman W ,  Li Y . Making AppDNA using T4 DNA ligase[J]. Bioorganic Chemistry, 2002, 30(5):332-349.

[2] Dai Q ,  Saikia M ,  Li N S , et al. Efficient chemical synthesis of AppDNA by adenylation of immobilized DNA-5'-monophosphate.[J]. Organic Letters, 2009, 11(5):1067-70.