jc-1线粒体膜电位荧光探针（染色原理、染色步骤、光谱）

JC-1线粒体膜电位荧光探针染色原理

JC-1 是一种可渗透膜的阳离子染料，用于研究细胞凋亡背景下的线粒体完整性。 

jc-1结构式

它选择性地进入线粒体并随着线粒体跨膜电位 (ΔΨm) 的改变而改变荧光特性。 在具有高线粒体 ΔΨm 的健康细胞中，JC-1 形成称为 J-聚集体的复合物，其发出红色/橙色荧光，并且可以通过流式细胞术使用 FL2 设置进行检测。 ΔΨm 的下降是细胞凋亡的一个非常早期的事件，导致 JC-1 单体发出绿色荧光（流式细胞仪上的 FL1 设置）。JC-1 也可用于荧光显微镜或读板机，使用 520-570 的激发 对于 J 聚集体，在 570-610 nm 处发射和在 485 nm 处激发，对于单体在 535 nm 处发射。

JC-1如何检测膜电位？

JC-1 形成带有红色荧光的聚集体（在健康的线粒体中）。
随着膜电位的降低，JC-1 变成单体，呈绿色荧光。
红绿荧光比例的变化被用作线粒体状况的指标。

JC-1线粒体膜电位荧光探针染色步骤（流式细胞仪法）：

1. 于6-，12或24-孔板上进行细胞铺板，密度为5×105 cells/mL。37℃，5% CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。 注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
2. 取0.5 mL细胞悬液至无菌的离心管内；
3. 室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清。
4. 用0.5 mL JC-1工作液重悬细胞，于37℃，5%CO2培养箱孵育15-30 min；注意：一般情况，15 min足以进行充分的染色。
5. 室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；
6. 用2 mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；
7. 重复步骤6）；
8. 用0.5 mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，即可进行后续的流式分析。注意：请马上进行流式定量分析，此细节很重要。
数据分析：含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测；含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1（FITC）通道检测。

JC-1光谱图

光谱特性：
※ 消光系数(cm -1 M -1) 1950001
※ 激发波长 (nm) 515
※ 发射波长(nm) 530

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