实现组织特异性干扰的工具——miR30结构
RNAi实验是研究基因功能的常用实验之一，shRNA的持续性表达通常借助于pol III型启动子，包括U6和H1，但要想实现特定组织中的基因沉默，几乎少不了特异性启动子及pol II型启动子的助力，然而U6和H1并不具有组织特异性，显然无法达到实验目的。那么有什么方法可以解决这个问题呢？
基于miR30的shRNA
大家还记得之前关于shRNA的干货内容吗？（没有印象的小伙伴可以查找“siRNA和shRNA的区别”阅览哦）shRNA和miRNA具有相似的作用机制（见图1），因此我们可以用miRNA的骨架（目前常用miR30）构建shRNA载体，即可由pol II型启动子驱动干扰载体，实现特定组织中的基因沉默。
图1 miRNA和siRNA作用机制
具体构建方案为将miR30的5'flanking region和3'flanking region序列保留，然后将其成熟区域的序列替换成靶点序列，示意图如下：
图2 基于miR30结构的shRNA载体
Mir30结构的优势
（1）启动子选择性多：基于miR30的shRNA可以通过多种pol II启动子转录，包括CMV、CAG和特异性启动子等。
（2）可与报告基因共表达：报告基因与shRNA共表达，方便检测shRNA的转录。
案例分享
安徽医科大学的王学富教授在题为“G protein-coupled receptor 35 attenuates nonalcoholic steatohepatitis by reprogramming cholesterol homeostasis in hepatocytes”的研究论文中使用了汉恒生物提供的AAV8-TBG-miR30-shRNA（Stard4）-mcherry特异性敲低小鼠肝脏中Star相关脂质转运蛋白4（Stard4）表达以研究G蛋白偶联受体35（GPR35）在非酒精性脂肪性肝病的作用（NAFLD），使用AAV8，用肝脏特异性启动子TBG，尾静脉注射，检测肝脏中Stard4的表达，发现其蛋白水平明显降低（见图3）。
图3 Stard4 WB结果图
文章链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36970193/
沈阳药科大学的吴春福教授的研究团队在题为“Hyperactive neuronal autophagy depletes BDNF and impairs adult hippocampal neurogenesis in a corticosterone-induced mouse model of depression”的研究论文中使用了汉恒生物提供的AAV-hSyn-miR30-shRNA（Atg5）特异性敲低神经元中自噬相关基因5（Atg5）的表达来研究神经元自噬对抑郁症的影响，为抑郁症治疗提供了新的思路。
文章链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36793868/
综上，miR30结构是实现特定组织基因沉默的有力工具，若对组织特异性干扰有疑问，欢迎咨询汉恒生物！
