天然药物分子的作用靶点发现方法学及案例分析——曾克武 北京大学天然药物及仿生药物

北京大学曾克武老师官网简介：http://dnm.sps.bjmu.edu.cn/szdw_20180110150803713087/trywhxyjs_20180110150803713087/192684.htm

一、背景

1.天然产物很好：

青蒿素、砒霜、二甲双胍（修饰山羊豆来源的山羊豆碱）、石杉碱甲（来源于蛇足草）、达菲（修饰八角茴香来源的莽草酸）

2.如何产生活性

产物活性分子与靶器官靶点结合发挥作用（化学生物学

）

二、实验室方法（其实验室2012年开始）

1.生物素标记法。

标记天然分子

苏木酮A抗神经炎

从细胞裂解液中获取结合蛋白，结合高分辨质谱鉴定靶标蛋白

葫芦素B抗肿瘤

2.基于环氧基标记策略（类似生物素标记）

合欢皂苷J13抗肿瘤

老师说是因为他结构复杂，生物素挂不上去

松果菊苷抗脑缺血

野菊花内酯

3.基于蛋白微阵列技术

前面两种方法基于组织细胞裂解液

丰度低的转录因子，蛋白可以通过此法改善。

野马追内酯

4.基于点击化学的细胞胞内靶点鉴定

活性分子结合某特定标签，在胞内和靶标结合，照射UV后能形成稳定复合物。（有一篇类似工作港大孙红哲教授团队在nature communication上确定了铬元素结合蛋白）

原人参二醇

5.****非标记技术。不对药物分子修饰

一类技术，在这仅介绍一些。

蛋白结合靶标后稳定性会变，原来60℃变性，与天然产物结合后不变了。通过电泳判断条带差异

原苏木素A

确定结合位点-点突变验证-分子互作研究

6.****多组分，中药复杂成分

1.磁性微球结合二硫甲酮，UV下活化，和天然产物分子无差别光交联→中药芯片，在细胞裂解液中吊

w五味子醇甲

y野菊花复杂成分-巨噬细胞

纳米金载体代替磁微球研究苏木

7.从小分子到大分子

z中药炮制或咖啡烘煮过程自组装

三、答疑

1. 方法只是普筛，只关心该技术能筛到什么，至于全不全，是不是关键的核心分子，或者筛不到，就换一个植物再研究，反正我国中草药多。
2. 

   48:37

   
   药物分子和靶标共晶很重要，可以和结构生物学实验室合作
3. 有商业化探针购买
4. 生物素是最可靠的，有些方法学实验室他有很多探针仅用于发表论文，生物素稳定可靠公认，点击化学近年很火（上文提到）。
5. 很多药物多靶标。只能多方法共同确认。如何通过技术方法区分结合蛋白与关键靶标
6. 如果不能确认功能，如抗炎，抗肿瘤。从传统角度来讲，有些中药抗疲劳，很宏观的药效，可以研究肌肉组织试图找靶点；补脾益气-消化道。
7. 和第一个问题差不多。比如人参和全身多组织作用
8. 芯片技术很成熟，可以直接购买。

工作出色，工作量大，希望大家有条件可以多关注他们课题组的文章（虽然我没在知网上找到他指导的学位论文，北大好像自己数据库）