单细胞测序样本处理指南（四）- 组织样本的速冻保存和运输（用于提核）

速冻保存的组织样本适用于单细胞核的抽提实验，高质量的单细胞核，可用于随后的单细胞核测序（snRNA-Seq）以及单细胞染色质可及性测序（scATAC-Seq）等实验。如因实验时间或实验条件所限，不能立即进行单细胞核抽提实验，可选择将组织样本进行速冻保存和运输。

一、动物组织样本的速冻保存

💠 将动物组织样本（保证每份样本湿重＞100mg）放入盛有预冷的PBS的培养皿中，反复润洗以去除组织表面的筋膜和血块。最后用干净纱布或吸水纸吸干液体（防止液体在组织表面形成冰晶），注意操作迅速，全程保持在冰上操作。

💠 将动物组织样本放入事先做好标记的冻存管（管壁与管盖上都做好标记），立即投入液氮速冻2min以上，随后可置于-80℃短暂保存（1周内）。

💠 将装有样本的冻存管转移至液氮中长期保存，并记录相应样本信息和冻存位置信息。

💠 速冻保存的组织样本：建议置于干冰环境中维持冷冻运输（-78℃），寄送前请先预估运输时间，确保运输过程中保留有足够干冰，运输过程中注意做好缓冲保护。

二、植物组织样本的速冻保存

💠 选取生长状态良好，幼嫩部位的植物组织（保证每份样本＞1g），放入盛有预冷ddH2O的培养皿中，反复润洗以去除组织表面的泥土等杂质。最后用干净纱布或吸水纸吸干液体（防止液体在组织表面形成冰晶），注意操作迅速，全程保持在冰上操作。

💠 将组织样本放入事先做好标记的冻存管（管壁与管盖上都做好标记），立即投入液氮速冻2min以上，随后可置于-80℃短暂保存（1周内）。

💠 将装有样本的冻存管转移至液氮中长期保存，并记录相应样本信息和冻存位置信息。

💠 速冻保存的组织样本：建议置于干冰环境中维持冷冻运输（-78℃），寄送前请先预估运输时间，确保运输过程中保留有足够干冰，运输过程中注意做好缓冲保护。

三、速冻样本的注意事项

💠 需保证组织状态良好，离体后立即速冻，并且保存和运输条件良好。

💠 珍贵样本可以减少用量，但每份样本量至少要保证能获得10万个细胞核。

💠 为确保实验顺利进行，推荐每个样本准备3份，每份单独分装，一份为预实验样本，因为不同物种、不同组织的实验参数需要优化；一份为正式实验样本；一份为备份。 

💠 请同时在管壁与管盖上标记样品信息，并且标记清晰。

💠 为避免速冻的离心管在运输过程中破碎，建议使用冻存管运输。如使用1.5mL离心管，请确保其质量良好，或者运输时将1.5mL离心管装入15mL离心管中。

💠 对生物样本进行速冻过程中，会频繁使用液氮。请佩戴护目镜等安全保护措施，并避免液氮飞溅泼洒，以免烫伤。