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PCR实验室污染的原因分析与对策

2022-08-10 16:58 作者:庄言消毒  | 我要投稿

关键词:PCR实验室核酸气溶胶污染 比林科汉核酸去除仪 诺沃赛德核酸去除液 避免假阳性

PCR反应具有较大扩增能力与极高的灵敏性等优点,在操作过程中,极其微量的污染即可造成假阳性结果的产生。

PCR实验室出现污染的原因:

1、 标本间交叉污染:主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本 而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于 吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。

2、 PCR试剂的污染:在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被 PCR核酸模板污染。

3、 PCR 扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见 的污染问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为 10^13拷贝/ML), 远远高于PCR检测数拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳性结果。

4、 气溶胶污染:在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而,气溶胶污染是一个值得特别重视的问题。

5、 实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力,其污染可能性也很大。

防止污染的方法

1、 合理分隔实验室

2、 吸样枪:吸样要慢,吸样时尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染

3、 预混和分装PCR试剂

4、 防止操作人员污染

5、 设立适当的阳性对照和阴性对照

6、 减少PCR循环次数

如何去除PCR实验室核酸污染?

      诺沃赛德核酸污染去除液,能够强力高效的去除实验室中核酸污染问题。诺沃赛德Novocide是国内唯一一款可以用于空间喷雾的核酸去除剂,试剂特点:不含过氧化氢,PH值接近中性,不含酶,强效的DNA片段捕捉粘合剂,腐蚀性极低。搭配比林科汉核酸污染清除仪能够达到1+1>2的效果。比林科汉核酸污染清除仪采用独特的干雾发散原理,超高速喷射,可以将核酸清除剂发散成小于1微米的颗粒,均匀扩散到空气中,以气溶胶的形式捕获核酸片段并分解掉污染源。其优点是覆盖面积广,纳米级干雾渗透性好,气溶胶均匀扩散,智能化系统,单位用量少成本低。


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