多规格不完全弗氏佐剂（IFA）的应用说明

IFAVax不完全弗氏佐剂（IFA）是一种不含分枝杆菌的油包水乳液。IFAVax有三种量：#IFA0010：10mL，#IFA050:5x10毫升和#IFA0100:10x10毫升。

艾美捷不完全弗氏佐剂（IFA）#OZB-IFA0100是一种油包水类似完全弗氏佐剂的乳液（CFA），不添加热杀分枝杆菌（丁酸分枝杆菌）。IFA和CFA是最常用的佐剂，已广泛用于实验免疫学。IFA已用于数十年的兽医疫苗接种实践。IFAVax由矿物油和乳化剂的混合物组成85%v/v油和15%v/v乳化剂的比例。重要的是IFAVax不是预先形成的乳液，因此必须与等体积的抗原，随后在使用前乳化。这个乳化剂是单油酸曼尼酯，一种由以下成分组成的酯亲水性残基甘露醇与油酸（不饱和C18脂肪酸）作为疏水部分。即使油乳液的作用机制仍然存在不太清楚，一些证据表明NOD2的要求。

此外，这些乳液是容易在注射时引起细胞损伤，因此，坏死细胞死亡过程中释放的内源性信号也可能有助于它们的佐剂活性。像与主要诱导Th1应答的CFA相反，IFA缺乏分枝杆菌成分，启动Th2因此炎症性较小。Th2结果的部分原因是库效应允许抗原在注射和抗体滴度的有效提高。弗氏佐剂旨在提供刺激强持久性所必需的抗原免疫反应

CFA的使用应负责任且谨慎以避免或尽量减少过度炎症。对于大多数应用程序，CFA通常仅用于初始免疫，而IFA是选择后续免疫接种。

不完全弗氏佐剂（IFA）结果示例：

图1：用卵清蛋白（OVA）或OVA+IFA免疫的小鼠中的抗体应答。OVA特异性所有同种型（A）或IgG1亚类（B）的抗体在几天后通过ELISA显示用可溶性OVA或用IFA吸附的OVA免疫（adapted from Albuquerque D et al. VacciM 2011;20(2): 1-5)

图2：使用或不使用IFA佐剂的血清抗体对免疫原反应的比较。老鼠用PBS或IFA中的100µg抗体免疫。第7天测定抗体滴度（A） 和14（B）通过ELISA。改编自Gavin等人《科学2006》；314

协议示例：

1.授权小鼠在免疫前至少7天适应动物设施。

2.在100µL生理盐水缓冲液中将抗原稀释至100µg的浓度

3.使用2个锁定路厄注射器制备方案中所述的OVA/CFA乳液，以获得更好的乳液稳定性

4.第1天：在小鼠背部的两个部位皮下注射0.1mL在CFA中乳化的抗原小鼠的数量（每只小鼠总计0.2 mL）

注：每次注射后，将针头插入皮下空间10至15秒，以避免乳液泄漏。小心地拔出针头。

5.第14天：皮下注射0.1 mL在IFA中乳化的抗原，每次一次地点

注：建议在加强后7至10天采集血清样本并检测抗体浓度注射如果浓度低于预期，则可给予额外加强剂量的IFA乳液14天之后。

6.在最后一剂给药后7至14天收集血清并纯化抗体